時間：2023-05-29 18:04:02
開篇：寫作不僅是一種記錄，更是一種創(chuàng)造，它讓我們能夠捕捉那些稍縱即逝的靈感，將它們永久地定格在紙上。下面是小編精心整理的12篇質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，希望這些內(nèi)容能成為您創(chuàng)作過程中的良師益友，陪伴您不斷探索和進(jìn)步。
【關(guān)鍵詞】紅芪膠囊；紅景天苷；高效液相色譜法
紅芪膠囊是由紅景天、黃芪、紅參、山藥等中藥的提取物加工制成的膠囊。近年國內(nèi)外研究表明高山紅景天具有滋補(bǔ)強(qiáng)壯、抗缺氧、抗疲勞、抗衰老及增強(qiáng)腦力、體力機(jī)能等方面的特殊功效［1,2］。紅景天中紅景天苷為其主要活性成分之一［3,4］，紅景天苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)［5］和藥理作用［6］較為明確。本實(shí)驗參照文獻(xiàn)［7,8］采用HPLC法對紅芪膠囊的主要活性成分紅景天苷的檢測方法進(jìn)行了研究。本方法結(jié)果準(zhǔn)確，靈敏度高，可作為紅芪膠囊的質(zhì)量控制。
1儀器與試藥
日本島津LC210Atvp高效液相色譜；SPD210A紫外-可見檢測器；N-2000色譜工作站；分析天平；甲醇（色譜純）；水（重蒸餾水）；紅景天苷對照品（中國藥品生物制品檢定所）；紅芪膠囊（自制）。
2方法與結(jié)果
2．1色譜條件流動相：甲醇-水（15：85）；檢測波長：223nm；流速：1ml/min；進(jìn)樣量：5μl；柱溫：45℃。
2．2對照品溶液的制備精密稱取紅景天苷對照品適量，加甲醇制成1ml含0.108mg的紅景天苷溶液。
2．3供試品溶液的制備取本品適量，研細(xì)，精密稱取0.35g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10ml，密塞，稱定重量，加熱回流1h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，放置，取上清液經(jīng)微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續(xù)濾液作供試品溶液。
2．4陰性對照液的制備按處方比例稱取紅景天外其他組分，按供試品溶液制備方法制備即得。
2．5陰性液干擾試驗精密吸取供試品液、陰性對照液和對照品液各5μl注入液相色譜儀中，由色譜圖可知，在與對照品色譜保留時間相應(yīng)的位置上，供試品溶液具有相同保留時間的包譜峰出現(xiàn)；而陰性液在此峰位無吸收，對本品中紅景天苷的測定無干擾。色譜圖見圖1。
圖1色譜圖2．6標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取紅景天苷對照品溶液（0.108mg/ml）1、2、3、4、5、6、7ml各置于10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，各取5μl注入液相色譜儀中，按上述色譜條件測定色譜峰面積。以色譜峰面積（A）對進(jìn)樣量（μg）進(jìn)行線性回歸，其回歸方程為A=743222X+414.06，r=0.9997。結(jié)果表明，在此色譜條件下，紅景天苷在進(jìn)樣量為0.054～0.378μg范圍內(nèi)，其重量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。
2．7精密度試驗精密吸取2.3項下配制供試品溶液5μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，測得紅景天苷色譜峰面積，計算相對偏差RSD為1.65%。
2．8重現(xiàn)性試驗精密稱取樣品6份,按2.3項下配制供試品溶液，分別進(jìn)樣5μl，測得紅景天苷色譜峰面積，計算相對偏差RSD為1.22%。
2．9回收率試驗精密稱取同一批已知紅景天苷含量的樣品6份，精密加入紅景天苷對照品，按2.3項下配制供試品溶液，按2.1項下色譜條件測定，結(jié)果見表1。表1回收率試驗（略）
2．10樣品含量測定取樣品3批，按2.3項下方法配制供試品,分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入高效液相色譜儀，按2.1項下色譜條件測定，以外標(biāo)法計算每粒膠囊中紅景天苷的含量，結(jié)果見表2。表2樣品中紅景天苷含量測定（略）
3討論
紅景天苷甲醇液經(jīng)波長掃描，在223nm處有最大吸收，故以223nm作為測定波長。本試驗選用高效液相色譜條件，分離效果好，陰性無干擾，精密度方法、穩(wěn)定性均符合要求，回收率高。
【參考文獻(xiàn)】
1丁樹利，朱兆儀.滋補(bǔ)壯陽中草藥紅景天屬植物研究進(jìn)展.國外醫(yī)學(xué)·植物藥分冊，1992，7（5）:198.
2張無敵，劉世清.藏藥紅景天的開發(fā)利用.中國民族民間醫(yī)藥雜志，1995，12：7-8.
3徐寶軍，鄭毅男，李向高，等.紅景天屬植物研究新進(jìn)展.中藥材，2000，23（9）：580-584.
4王曙，王峰鵬.紅景天屬植物化學(xué)成分研究概述.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，1991，3（4）：58-65.
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關(guān)鍵詞：審計人 審計質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 內(nèi)部審計
審計環(huán)境、審計機(jī)構(gòu)、審計人員、審計程序、審計標(biāo)準(zhǔn)、審計手段等都對內(nèi)部審計質(zhì)量有直接或間接聯(lián)系。而作為其中最活躍的審計人，以及作為審計人員行為指南的審計質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，我們認(rèn)為對內(nèi)部審計質(zhì)量起著舉足輕重的作用，因為所有審計行為都是通過審計人員起作用，而所有審計人員行為的依據(jù)便是審計質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
一、影響內(nèi)部審計質(zhì)量的因素――審計人
（一）內(nèi)部審計人員的現(xiàn)狀
1、內(nèi)部審計機(jī)構(gòu)人員構(gòu)成相對單一
以電力企業(yè)內(nèi)部審計機(jī)構(gòu)為例，人員構(gòu)成基本上是財務(wù)、工程、營銷三個專業(yè)，且內(nèi)審人員往往是一專而不多能；懂財務(wù)審計知識的多，掌握現(xiàn)代管理知識、科技知識，具備綜合分析能力的復(fù)合型人才少，整體上應(yīng)對復(fù)雜審計工作局面的能力比較弱；綜合分析能力不足。
2、專業(yè)技能欠缺，造成審計結(jié)論不精準(zhǔn)
表現(xiàn)在一些審計人員局限于賬面審計而忽略賬外內(nèi)容，不能將企業(yè)經(jīng)營特點(diǎn)、存在的問題進(jìn)行深度披露與揭示；一些審計人員未對企業(yè)內(nèi)控制度深入審查和測試，而在審計結(jié)論上直接采用被審單位所提供資料，從而造成了很大的審計風(fēng)險。
3、審計風(fēng)險意識淡薄
在審計領(lǐng)域持續(xù)拓展的大環(huán)境下，審計任務(wù)壓力增加，人員缺乏、任務(wù)繁重的矛盾造成審計人員疲于應(yīng)付，無暇兼顧到審計質(zhì)量，致使出現(xiàn)實(shí)施的審計項目不少，而審計精品不多，審計成果質(zhì)量不高，審計未能審深審?fù)傅默F(xiàn)象存在，埋下風(fēng)險隱患。
4、審計理論鉆研氣氛不濃，未形成常態(tài)的學(xué)習(xí)機(jī)制
知識更新速度不及業(yè)務(wù)增長速度，對國內(nèi)外內(nèi)審發(fā)展?fàn)顩r、經(jīng)驗技術(shù)等知識了解甚少，甚至對日常工作常用法律、法規(guī)不熟悉不精通，審計發(fā)現(xiàn)和分析風(fēng)險問題的能力較弱， 審計結(jié)論的依據(jù)模糊不清。
5、審計職業(yè)道德需要提升
受來自各方面的因素影響，審計人員在審計過程中，對審計結(jié)果不能做到以客觀的態(tài)度進(jìn)行評價，針對審計發(fā)現(xiàn)的問題，缺乏揭示和披露的勇氣，往往大事化小、小事化了，隨意性較大，無法向高層管理層提供真實(shí)的信息渠道，影響管理者的決策。
（二）內(nèi)審人員應(yīng)具備和期望達(dá)到的能力
對于內(nèi)審人員存在的種種局限，有些是體制問題造成，在短期內(nèi)可能無法改變，但對于作為具有主觀能動性的審計人員來說，卻能通過自身的努力和學(xué)習(xí)獲得以下能力，最大限度地保證審計質(zhì)量：
1、專業(yè)勝任能力
業(yè)務(wù)能力。高素質(zhì)的審計人員，首先要精通工作中常用到的專業(yè)知識，會計和審計理論及實(shí)務(wù)構(gòu)成審計人員知識結(jié)構(gòu)的主體。以計算機(jī)為代表的信息技術(shù)的飛速發(fā)展和廣泛運(yùn)用給人們的傳統(tǒng)生活方式和工作方式帶來了猛烈的沖擊和震撼，企業(yè)資源計劃（ERP）、電子商務(wù)的推廣和運(yùn)用，使企業(yè)內(nèi)部控制發(fā)生了改變，審計人員必須面對并適應(yīng)變化，不斷調(diào)整自己的知識結(jié)構(gòu)；與此同時，主審除具備專業(yè)經(jīng)驗和全面的業(yè)務(wù)能力外，還應(yīng)作好團(tuán)結(jié)、協(xié)調(diào)工作，形成審計組的合力。
溝通或者說處理人際關(guān)系的能力。良好而有效的溝通應(yīng)注意以下兩點(diǎn)：注意溝通立場，多站在被審單位立場考慮問題，多想想“假如我是被審單位經(jīng)營者，我會怎么辦”，換位思考更能有助于審計人員拓寬思路，考量審計建議的可行性；參與式審計。要與被審計者建立一種更加協(xié)調(diào)的工作關(guān)系，培養(yǎng)一種溫馨和情感上的關(guān)系，甚至參與審計建議的實(shí)施，給被審計人提供發(fā)表自己意見的機(jī)會，審計報告中重點(diǎn)放在問題產(chǎn)生原因和可能造成的影響，多采用建設(shè)性措辭。
2、審計的悟性
對同一個審計事項，有的人能一眼看穿本質(zhì)，而有的人卻浮在事項的表面不能參透，這也許存在專業(yè)技能差別，但我們認(rèn)為更可能是悟性使然。何謂悟性？悟性即是一個人通過對事物的觀察分析而發(fā)現(xiàn)其本質(zhì)的能力，悟性高的人通常都是將自己的體會和感受融合其中，獲得屬于自己的東西。工作中的悟性并非可遇不可求，而是可以在工作實(shí)踐中收獲的。
3、工作興趣和主觀能動性
在審計實(shí)踐中，有許多的內(nèi)審人員都感覺到內(nèi)審工作容易與他人產(chǎn)生矛盾，開展困難，對審計工作缺乏行動力，缺少做好內(nèi)審工作的意愿。那是因為他們誤解了內(nèi)審的職能，沒有感受到工作的樂趣，審計的魅力，所以不能發(fā)揮主觀能動性。而從一個微小的審計項目來看，當(dāng)你的工作得到管理層的認(rèn)可，建議得到采納，企業(yè)的某一項管理因你而有所改善，某一項風(fēng)險因你而避免，這樣的成就感是其他工作所體會不到的。
4、團(tuán)隊協(xié)作精神
審計是一項尤其需要團(tuán)隊合作的工作，審計質(zhì)量的高低，不能代表其中個人的審計能力，而代表著審計組集體的智慧，是審計組的整體素質(zhì)與能力的表現(xiàn)。要把不同水平的審計人員科學(xué)、合理的組織起來，使其成為一個有機(jī)的整體，作用于審計過程，以獲得最佳的綜合效果，從而保證審計質(zhì)量。
二、影響內(nèi)部審計質(zhì)量的因素――審計質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
（一）內(nèi)部審計質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的現(xiàn)狀
我國雖然制定了統(tǒng)一的內(nèi)部審計基本準(zhǔn)則以及一些具體準(zhǔn)則和實(shí)務(wù)指南，某些行業(yè)和企業(yè)也針對部分審計業(yè)務(wù)制定了實(shí)務(wù)操作指南和審計辦法，但內(nèi)部審計的范圍之廣，內(nèi)容之豐富，審計對象之多樣性，使內(nèi)部審計難以有統(tǒng)一而具體的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，因此在實(shí)際執(zhí)行審計項目時，較多地靠審計人員的主觀判斷，致使內(nèi)部審計工作有較大的彈性，不同審計人員對同一審計事項審計的深度有所差異，造成審計結(jié)果有所不同，致使內(nèi)部審計工作質(zhì)量難以保證。
對審計質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行較弱，主要表現(xiàn)在：有的“重審計實(shí)施、輕審計準(zhǔn)備”，套用通用的審計方案，與企業(yè)現(xiàn)實(shí)不符，可操作性不強(qiáng)，造成審計重點(diǎn)不突出，審計人員進(jìn)入狀態(tài)慢，影響審計質(zhì)量。
部分審計人員在實(shí)施現(xiàn)場審計時，未按照內(nèi)部審計準(zhǔn)則、企業(yè)內(nèi)部規(guī)章制度及審計方案的要求，實(shí)施必要的審計程序，從而導(dǎo)致個別項目出現(xiàn)重大“漏審”現(xiàn)象。
有的“重審計問題、輕審計規(guī)范”，對審計結(jié)論的客觀性和真實(shí)性留下了風(fēng)險隱患；有的“重審計報告、輕成果落實(shí)”，造成審計流于形式。
內(nèi)部審計質(zhì)量控制的廣度和深度不夠，出現(xiàn)內(nèi)部審計的無風(fēng)險狀態(tài)，對內(nèi)部審計的檢查處于真空地帶，客觀上也導(dǎo)致內(nèi)審質(zhì)量不高。
針對內(nèi)部審計而言，雖已頒布了《內(nèi)部審計具體準(zhǔn)則―內(nèi)部審計質(zhì)量控制》，且某些行業(yè)和企業(yè)也制定了相應(yīng)的審計質(zhì)量管理辦法，但在實(shí)踐過程中，多數(shù)企業(yè)做得不到位。在實(shí)務(wù)中，內(nèi)部審計自身督導(dǎo)和質(zhì)量管理尚且欠缺，更遑論外部評價，審計責(zé)任追究更是流于形式。
（二）對于審計質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的思考
從社會審計的標(biāo)準(zhǔn)化審計程序中得到啟發(fā)，內(nèi)部審計是否也應(yīng)該思考：面對水平不一的審計人員，制定怎樣的審計質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，才能最大限度地消除審計人員水平的差異？誠然，內(nèi)部審計的審計范圍廣，審計對象和審計內(nèi)容具有多樣性，但內(nèi)部審計可以尋求項目質(zhì)量和審計效率的最佳結(jié)合點(diǎn) 。良好的控制制度可以在一定程度上預(yù)防和彌補(bǔ)現(xiàn)場審計人員素質(zhì)與經(jīng)驗的不足，減少現(xiàn)場審計人員工作的隨意性，可以及時發(fā)現(xiàn)與彌補(bǔ)現(xiàn)場審計人員的錯誤與疏漏，保證審計工作的質(zhì)量。
例如：某公司內(nèi)部審計部門在制定審計底稿質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時，嘗試編制標(biāo)準(zhǔn)化審計工作底稿模板，模板的編制注重可操作性，其應(yīng)用要求審計人員采用標(biāo)準(zhǔn)的作業(yè)流程，使無經(jīng)驗的審計人員也能理解工作意圖、掌握正確方法，以減少個體理解與判斷差異的影響，模板的編制根據(jù)被審單位行業(yè)特點(diǎn)，參考任期經(jīng)濟(jì)責(zé)任審計指南及歷次審計底稿，對其他應(yīng)收款審計內(nèi)容、重點(diǎn)和方法在底稿中進(jìn)行體現(xiàn)，不僅強(qiáng)化了過程控制，有助于提高審計質(zhì)量，而且省卻了底稿中大量表格的編制和重復(fù)性語言的敘述，提高了審計效率。這種對制定審計作業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的嘗試對其他企業(yè)或可有所參考。
三、結(jié)束語
內(nèi)部審計如舟，質(zhì)量是舵，審計人員是舵手。在當(dāng)前內(nèi)部審計轉(zhuǎn)型時期，要加強(qiáng)審計質(zhì)量管理，促進(jìn)企業(yè)的發(fā)展和自身的成長，突出人才培養(yǎng)和審計標(biāo)準(zhǔn)化建設(shè)是必由之路，也是每一個審計人應(yīng)思考的永恒主題。
參考文獻(xiàn)：
[1]張慶龍.對我國當(dāng)前內(nèi)部審計幾個問題的思考[J].中國內(nèi)部審計，2011
【摘要】 目的 對糯米藤根藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行初步研究。方法 研究糯米藤根藥材粉末顯微特征，并以標(biāo)準(zhǔn)藥材為對照，研究建立糯米藤根藥材的薄層鑒別方法。采用藥典方法檢測藥材中水分、灰分等含量，測定糯米藤根藥材水溶性及醇溶性浸出物含量。結(jié)果 建立了糯米藤根藥材粉末的顯微鑒別以及藥材的薄層鑒別方法，并確定了糯米藤根藥材浸出物含量。結(jié)論 研究結(jié)果為完善糯米藤根藥材質(zhì)量控制方法，建立該藥材國家標(biāo)準(zhǔn)奠定了實(shí)驗基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】 糯米藤根;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);顯微鑒別;薄層鑒別
【Abstract】 Objective To study of the quality standards of Memorialis hirta(Bl.)Wedd.Methods The powder microstructure of Memorialis hirta(Bl.)Wedd was researched，and thin layer chromatography(TLC)was established taking standard medicines as control.The content of moisture and ash residue was measured by the related method in pharmacopoeia，and the content of watersoluble extractive and 50% ethanolsoluble extractive from Memorialis hirta(Bl.)Wedd was also detected.Results Microidentification method of the drug powder and TLC identification method of the crude drug were established，and the content of both extracts from Memorialis hirta(Bl.)Wedd was determined.Conclusion This research lays the experimental basis for improving quality control methods of Memorialis hirta(Bl.)Wedd and establishing the national standards.
【Key words】 Memorialis hirta(Bl.)Wedd;quality standard;microscopic identification;thinlayer chromatography
糯米藤根為蕁麻科蔓苧麻屬植物糯米團(tuán)Memorialis hirta(Bl.)Wedd.的干燥根[13]，具有健脾消食，清熱利濕之功效，臨床用于消化不良，食積胃痛，脾虛帶下等癥，外用可治瘡癤、創(chuàng)傷等[1，4]。糯米藤根分布于陜西、福建、江西、廣西、四川、貴州及云南等省區(qū)，主產(chǎn)雅安、宜賓、重慶等地[2，5]。對糯米藤根藥材的質(zhì)量控制僅《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》1987年版有簡單的外觀性狀描述[2]，2005年版中國藥典尚未收載。本課題組對糯米藤根藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了初步研究，建立了糯米藤根藥材粉末的顯微鑒別方法;以糯米藤根標(biāo)準(zhǔn)藥材為對照，確定了糯米藤根藥材的薄層鑒別方法;測定了糯米藤根藥材水溶性及醇溶性浸出物含量。研究結(jié)果為完善糯米藤根藥材質(zhì)量控制方法，建立該藥材國家標(biāo)準(zhǔn)奠定了實(shí)驗基礎(chǔ)。
1 儀器與試藥
1.1 儀器
奧林巴斯CH20顯微鏡(日本);硅膠G薄層預(yù)制板(中國青島)。
1.2 材料與試藥
糯米藤根藥材采集或購于四川各地，產(chǎn)地見表2.由成都中醫(yī)藥大學(xué)裴瑾教授鑒定為蕁麻科蔓苧麻屬植物糯米團(tuán)Memorialis hirta(Bl.)Wedd.的干燥根。其余所用試劑均為分析純。
2 方法與結(jié)果
2.1 粉末特征
照《中國藥典》2005版一部顯微鑒別法(附錄Ⅱ C)[6]，觀察糯米藤根藥材粉末特征。鑒定結(jié)果與文獻(xiàn)[4，78]報道一致。
本品粉末為黃白色。導(dǎo)管多為網(wǎng)紋導(dǎo)管和具緣紋孔導(dǎo)管，直徑20～51 μm.淀粉粒多為單粒，類球形、長圓形、卵圓形或不規(guī)則形，直徑10～40 μm，臍點(diǎn)裂縫狀或點(diǎn)狀，層紋不明顯，復(fù)粒少，多為2 分粒組成。纖維長棱形，多不完整，淡黃色，直徑約35 μm，壁厚約13 μm，胞腔狹窄。不規(guī)則團(tuán)塊狀物棕黃色或紅棕色，大小不一(圖1)。
2.2 薄層鑒別
取糯米藤根粉末3 g，加乙醇100 ml，加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20 ml使之溶解，用乙酸乙酯提取3次(20 ml、15 ml、10 ml)，合并提取液，蒸干，殘渣加甲醇1 ml使之溶解，作為供試品溶液。另取糯米藤根對照藥材3 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部Ⅵ B)試驗，吸取上述兩種溶液各2～4 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯乙酸乙酯甲酸(7︰2︰1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%硫酸乙醇溶液，105 ℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)(圖2)。另以三氯甲烷甲醇甲酸(24︰3︰4)為展開劑進(jìn)行驗證，展開，取出，晾干，噴以5%硫酸乙醇溶液，置105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)(圖3)。
2.3 檢查
2.3.1 水分 照《中國藥典》2005年版一部水分測定法(附錄Ⅸ H 第一法)測定，結(jié)果見表1.10批糯米藤根藥材中水分平均含量為15.15%.
2.3.2 總灰分 照《中國藥典》2005版一部灰分測定法(附錄Ⅸ K)測定，結(jié)果見表1.10批糯米藤根藥材總灰分平均含量為9.69%.
2.3.3 酸不溶性灰分 取糯米藤根藥材樣品，按中國藥典2005年版一部酸不溶性灰分測定法(附錄Ⅸ K)測定，結(jié)果見表1.10批糯米藤根藥材酸不溶性灰分平均含量為2.88%.
2.4 浸出物測定
2.4.1 水溶性浸出物測定 照《中國藥典》2005版一部浸出物測定法(附錄ⅩA)熱浸法測定，結(jié)果見表1.10批糯米藤根藥材水溶性浸出物平均含量為27.86%.
2.4.2 醇溶性浸出物測定 以產(chǎn)地為重慶的藥材進(jìn)行研究，確定最佳溶劑。分別以水、30%、50%﹑70%、95%乙醇為溶劑，按中國藥典2005年版一部浸出物項下熱浸法測定，見表2.結(jié)果表明，以50%乙醇為溶劑測得的浸出物含量相對較高，且操作簡便，數(shù)據(jù)重復(fù)性較好，因此我們選擇50%乙醇為溶劑測定醇溶性浸出物。以50%乙醇為溶劑，照《中國藥典》2005版一部浸出物測定法(附錄Ⅹ A)熱浸法測定，結(jié)果見表1.10批糯米藤根藥材醇溶性浸出物平均含量為14.13%.表2 水及不同濃度乙醇浸出物含量(n=3)表1 水分、灰分、浸出物測定結(jié)果(n=3)
3 討論
糯米藤根中含有大量淀粉類成分，當(dāng)以水或含水量高的乙醇作溶劑測定其浸出物含量時，溶液因粘稠難于過濾，造成操作困難，數(shù)據(jù)重復(fù)性差;因此，我們兼顧浸出物含量和操作簡便等因素，選擇50%乙醇作溶劑。
進(jìn)行糯米藤根薄層鑒別時，選用了三氯甲烷甲醇體系和甲苯乙酸乙酯體系，調(diào)節(jié)比例后，三氯甲烷甲醇體系可見明顯的6個點(diǎn)，甲苯乙酸乙酯體系可見明顯的9個點(diǎn)。但兩個體系中的點(diǎn)都有一定的拖尾現(xiàn)象，為達(dá)到良好的呈點(diǎn)性，我們在體系中又加入甲酸，所得的分離效果理想。綜合考慮我們最后選擇甲苯乙酸乙酯甲酸(7︰2︰1)為糯米藤根的薄層鑒別條件。
糯米藤根生于濕潤、肥沃和陽光充足的土坎、矮草叢中或石縫中，分布于陜西、福建、江西、廣西、四川、貴州及云南等省區(qū)，主產(chǎn)雅安、宜賓、重慶等地[2，5]。但該藥材尚未收載入藥典標(biāo)準(zhǔn)，在其栽培、加工及銷售過程中缺乏適當(dāng)?shù)馁|(zhì)量控制方法，制約了其發(fā)展。本課題研究結(jié)果為制訂切實(shí)可行的糯米藤根藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，促進(jìn)其深層次開發(fā)利用提供了一定的科學(xué)依據(jù)。
參考文獻(xiàn)
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[4] 全國中草藥匯編編寫組.全國中草藥匯編:上冊[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，1976:941.
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方法：采用HPLC法對制劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Re進(jìn)行含量測定。
結(jié)果：人參皂苷Rg1和人參皂苷Re在規(guī)定進(jìn)樣量范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好、穩(wěn)定性良好，回收率合格。
結(jié)論：該方法準(zhǔn)確，可靠，可行性及重復(fù)性良好，可作為控制補(bǔ)中益氣顆粒質(zhì)量的辦法。
關(guān)鍵詞：補(bǔ)中益氣 顆粒 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) HPLC
Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2014.11.538
【中圖分類號】R2 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B 【文章編號】1671-8801（2014）11-0318-01
補(bǔ)中益氣配方顆粒由黃芪、白術(shù)、陳皮、升麻、柴胡、人參、炙甘草、當(dāng)歸組成。具有補(bǔ)中益氣、升陽舉陷之功。主治脾胃氣虛，四肢倦怠，氣虛下陷，脫肛久痢等癥 [1]。
為控制該制劑的內(nèi)在質(zhì)量，確保臨床用藥安全有效，本文應(yīng)用高效液相色譜法對人參中主要有效成分人參皂苷Rg1、人參皂苷Re進(jìn)行了含量測定 [2，3]。
1 實(shí)驗材料與試劑
1.1 色譜條件。色譜柱：Lichrospher-C18（江蘇漢邦科技有限公司，200×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-水（1∶4）；檢測波長：203nm；柱溫：35℃；流速：1.0ml/min [4]。
1.2 對照品溶液的制備。取人參皂苷Rg1、人參皂苷Re對照品適量，加甲醇制成每1ml各含0.2mg的溶液，即得。
1.3 供試品溶液的制備。取本品約3g，研細(xì)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，超聲處理30分鐘，放冷，搖勻，濾過，殘渣加水10ml使溶解，用水飽和的正丁醇提取4次，每次10ml，合并正丁醇液，用氨試液洗脫2次，每次20ml，棄去氨試液，再用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次20ml，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇稀釋至10ml量瓶中定量，搖勻，濾過，即得。
1.4 陰性對照溶液的制備。取缺人參的陰性對照樣品約3g，精密稱定，按供試品溶液制備方法，同法制成陰性對照溶液。分別精密吸取人參皂苷Rg1、人參皂苷Re對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各10ul，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定。
2 方法學(xué)驗證
供試品溶液色譜峰中，在與人參皂苷Rg1、人參皂苷Re對照品相應(yīng)的保留時間有吸收峰，而陰性對照溶液則在相應(yīng)的保留時間無吸收峰出現(xiàn)，說明陰性對照無干擾。
2.1 線性關(guān)系考察。
2.1.1 人參皂苷Rg1。分別精密吸取人參皂苷Rg1對照品溶液（0.2130mg/ml）2、4、6、8ml置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，配成不同濃度的系列對照品溶液，分別精密吸取溶液各10μl，注入液相色譜儀，得回歸方程為：Y=358.26X-4.62，r=0.9994，結(jié)果表明：人參皂苷Rg1對照品進(jìn)樣量的范圍內(nèi)，良好的線性關(guān)系。
2.1.2 人參皂苷Re。分別精密吸取人參皂苷Re對照品溶液（0.1726mg/ml）2、4、6、8ml置10ml量瓶中，參照2.1.1法色譜條件測定，得回歸方程為：Y=294.90X+2.40，r=0.9996，結(jié)果表明：人參皂苷Re對照品進(jìn)樣量在0.3452―1.7260μg范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。
2.2 精密度試驗。分別精密吸取人參皂苷Rg1對照品溶液（0.2130mg/ml）、人參皂苷Re對照品溶液（0.1726mg/ml）各5ul，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，分別測定人參皂苷Rg1、人參皂苷Re峰面積積分值，計算其RSD分別為0.33%、0.36%。結(jié)果表明：精密度良好。
2.3 重復(fù)性試驗。取補(bǔ)中益氣顆粒（批號200911）約3g，精密稱定，平行6份，按供試品溶液的制備方法制成供試液，分別進(jìn)樣10μl，分別測得人參皂苷Rg1、人參皂苷Re峰面積積分值并計算其總量，結(jié)果表明補(bǔ)中益氣顆粒中人參皂苷Rg1、人參皂苷Re總量的平均含量為0.0442%，RSD為1.45%。
2.4 穩(wěn)定性試驗。取補(bǔ)中益氣顆粒（批號為200911）的供試品溶液，分別于0、1、2、4、8h，分別進(jìn)樣10ul，測定人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的峰面積，計算其RSD分別為0.68%、0.78%。結(jié)果表明：樣品溶液在8小時內(nèi)穩(wěn)定。
2.5 回收率試驗。取已知含量的樣品（批號200911）1.50g，精密稱定，分別加入人參皂苷Rg1、人參皂苷Re對照品適量，按供試品溶液的制備方法制備加樣回收供試品溶液，分別進(jìn)樣10μl，測定，以下列公式計算回收率，結(jié)果見表1，2。
表1 人參皂苷Rg1回收率試驗
表2 人參皂苷Re回收率試驗
試驗結(jié)果表明：回收率在96%-100%之間，加樣回收率良好。
3 實(shí)驗結(jié)果
樣品測定：取樣品約3g，精密稱定，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)正文[含量測定]項下操作，結(jié)果見表3。
表3 樣品的含量測定結(jié)果
上述結(jié)果，補(bǔ)中益氣顆粒中人參皂苷Rg1與人參皂苷Re總量為0.409-0.441mg/g，暫定本品每1g含人參以人參皂苷Rg1（C42H72O14）人參皂苷Re（C48H82O18）計，不得少于0.30mg。
4 結(jié)論與討論
本文曾采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器對方中黃芪進(jìn)行含量測定，結(jié)果黃芪甲苷與相鄰的色譜峰沒有完全分離，有重疊現(xiàn)象，故暫不對黃芪中黃芪甲苷進(jìn)行含量測定 [5，6]。
由于黃芪中黃芪甲苷的含量測定有干擾，后參考相關(guān)文獻(xiàn)，采用乙腈-水（1∶4）為流動相；檢測波長：203nm；對方中人參皂苷Rg1與人參皂苷Re的總量進(jìn)行了測定，結(jié)果該法方法簡便、專屬性強(qiáng)及重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于該制劑的質(zhì)量控制和分析。
參考文獻(xiàn)
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[2] 江陰天江藥業(yè)科研部，等.中藥配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（鑒定方法）.2007
[3] 江陰天江藥業(yè)科研部，等.中藥配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（含量測定方法）.2007
[4] 王幕鄒.常用中草藥高效液相色譜分析[M].北京：科學(xué)出版社.1998.171
目的測定健腦補(bǔ)腎膠囊中桂皮醛的含量，制定健腦補(bǔ)腎膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用高效液相色譜（HPLC）法測定健腦補(bǔ)腎膠囊中桂皮醛的含量。結(jié)果桂皮醛在7.70～38.5 μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好、精密度高、穩(wěn)定性好、重復(fù)性符合要求，經(jīng)加樣回收率實(shí)驗，桂皮醛平均回收率為99.00%，RSD為1.56%，表明該方法的準(zhǔn)確度高。結(jié)論所研究的方法能較好地測出健腦補(bǔ)腎膠囊中桂皮醛的含量，并可用以有效控制健腦補(bǔ)腎膠囊的質(zhì)量。
【關(guān)鍵詞】 健腦補(bǔ)腎膠囊； 桂皮醛； 高效液相色譜法
本品來源于健腦補(bǔ)腎丸［1］，健腦補(bǔ)腎丸為中藥保護(hù)品種，為更好地促進(jìn)吸收，筆者研制了健腦補(bǔ)腎膠囊，并在制定其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時增加了含量測定項。采用高效液相色譜法，對方中主要成分肉桂、桂枝進(jìn)行含量控制。參照《中國藥典》［2］2005年版Ⅰ部肉桂藥材含量測定方法，建立高效液相色譜法測定本品中桂皮醛含量的方法。
1 儀器與試藥
1.1 儀器AG-135型電子分析天平（梅特勒），高效液相色譜儀（LC-10AT），SPD-10Avp檢測器，Maxsil C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；乙腈-水（35∶75）為流動相；檢測波長為290 nm；流速1.0ml/min；柱溫25℃。
1.2 對照品桂皮醛（中國藥品生物制品檢定所，約2 ml， 710-9005）。歸一化法測定，以5倍量標(biāo)準(zhǔn)濃度進(jìn)樣，本品純度為99.23%。
1.3 試劑乙腈為色譜純，水為自制重蒸餾水，其余試劑均為分析純。
1.4 樣品由本實(shí)驗室制備。
2 方法與結(jié)果
2.1 色譜條件選擇
2.1.1 檢測波長選擇精密稱取桂皮醛對照品適量，加甲醇制成每毫升含15 μg的溶液，照分光光度法（《中國藥典》2005年版Ⅱ部附錄Ⅳ A），在波長200～400 nm的范圍內(nèi)掃描，結(jié)果波長為290 nm時桂皮醛有最大吸收。參照《中國藥典》2005年版Ⅰ部肉桂含量測定項下色譜條件，因此選擇290 nm作為桂皮醛的紫外檢測波長。
2.1.2 流動相選擇參照有關(guān)參考文獻(xiàn)，初步選定乙腈-水作為桂皮醛含量測定流動相系統(tǒng)，經(jīng)梯度洗脫遴選，最終確定乙腈-水（35∶75）為流動相。
2.2 樣品處理條件的選擇
2.2.1 提取溶劑選擇取本品內(nèi)容物約0.6 g，共3份，精密稱定，置錐形瓶中，分別精密加入甲醇、乙醇、氯仿25 ml；稱定重量，超聲處理（120 W，40 kHz）30 min，取出，放冷，再稱定重量，以同種溶劑補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。各吸取20 μl注入液相色譜儀，測定。結(jié)果以甲醇、乙醇處理樣品時，桂皮醛含量無明顯差異，但乙醇處理樣品，提取物質(zhì)較多，桂皮醛峰處有干擾，以氯仿處理樣品，提取不完全，以甲醇處理樣品，桂皮醛獲得良好分離，故選擇以甲醇作為提取溶劑。
2.2.2 提取時間選擇取本品內(nèi)容物約0.6 g，精密稱定，共3份，各置錐形瓶中，精密加甲醇25 ml，稱定重量，分別超聲處理20，30，40 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失重量。搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。各吸取20 μl注入液相色譜儀，測定。結(jié)果表明，超聲處理30，40 min桂皮醛含量無明顯差異，桂皮醛基本提取完全，因此確定該樣品超聲時間為30 min。
2.2.3 供試品溶液制備取裝量差異項下本品內(nèi)容物約0.6 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇25 ml，稱定重量，超聲處理30 min，取出，放冷，再稱定重量，以甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
2.3 線性關(guān)系的考察精密稱取桂皮醛對照品20 mg（19.25 mg），置50 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；精密吸取5 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，再分別精密量取 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml各置10 ml量瓶中，以甲醇稀釋至刻度，作為對照品溶液，分別吸取上述對照品溶液，進(jìn)樣(20 μl定量環(huán))，測定峰面積，記錄色譜圖在7.70～38.5 μg/ml濃度范圍內(nèi)，以色譜峰面積對樣品進(jìn)樣濃度作曲線(見圖1)。得回歸方程為：Y=159 919x-14 402，r=0.999 9。
以上結(jié)果表明，在7.70～38.5μg/ml范圍內(nèi)，桂皮醛峰面積值與進(jìn)樣濃度有良好的線性關(guān)系。
2.4 陰性對照實(shí)驗取不含肉桂和桂枝的陰性試制樣品0.6 g，精密稱定，同“供試品溶液制備”項下，同法處理后，制得陰性對照液，分別取陰性對照液、供試品溶液、對照品溶液各進(jìn)樣20 μl，記錄色譜圖。
結(jié)果表明，在陰性對照圖譜中，桂皮醛峰處無干擾。
2.5 精密度實(shí)驗取桂皮醛對照品溶液20μl，注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，峰面積積分值的RSD為0.81%，表明儀器的精密度良好。
2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗取同一份供試品溶液分別于0，2，4，6，8，12 h進(jìn)樣，結(jié)果表明供試品溶液在12 h內(nèi)峰面積RSD為0.48%，穩(wěn)定性良好。
2.7 重復(fù)性實(shí)驗取同一批號的樣品6份，分別按供試品制備項下方法制備，用不同儀器測定。結(jié)果表明，平均含量為0.98 mg/g，RSD為1.17%。實(shí)驗方法的重復(fù)性良好。
2.8 回收率實(shí)驗取已知含量的健腦補(bǔ)腎膠囊內(nèi)容物6份，每份約0.3 g，精密稱定，置于25ml量瓶中，分別精密加入桂皮醛對照品溶液（0.32 mg/ml） 1.0 ml，再精密加入甲醇24 ml，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，加甲醇補(bǔ)足減失得重量，搖勻，濾過，注入液相色譜儀，測定，平均回收率為99.00%，RSD為1.56%，加樣回收率良好?；厥章剩?）＝(實(shí)測值－樣品含量)/對照品加入量×100%
2.9 3批樣品測定取3批樣品，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案擬訂方法測定，桂皮醛含量結(jié)果見表1。表1 健腦補(bǔ)腎膠囊樣品中桂皮醛含量測定結(jié)果（略）
3 討論
樣品中桂皮醛在7.70～38.5 μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好、精密度高、穩(wěn)定性好、重復(fù)性符合要求。經(jīng)加樣回收率實(shí)驗，桂皮醛平均回收率為99.00%，RSD為1.56%。本實(shí)驗方法具分離效果好，靈敏、快速、準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)，能較好地測出健腦補(bǔ)腎膠囊中桂皮醛的含量，可有效控制健腦補(bǔ)腎膠囊的質(zhì)量。
【參考文獻(xiàn)】
［1］《中華人民共和國衛(wèi)生部 藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第16冊·健腦補(bǔ)腎丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［S］.［標(biāo)準(zhǔn)號：WS3-B-3088-98］：131.
關(guān)鍵詞：復(fù)方垂盆草膠囊；巖白菜素；TLC；HPLC；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
中圖分類號：R284 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1673-2197(2008)08-000-00
垂盆草膠囊是《中國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第七冊品種“復(fù)方垂盆草沖劑”(WS3-B-1391-93)基礎(chǔ)上新研制的中藥制劑，由垂盆草清膏，矮地茶清膏組成。它能夠清熱解毒，活血利濕，降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶，可用于急性肝炎及遷延性肝炎、慢性肝炎的活動期[1]。為了有效控制本品質(zhì)量，在復(fù)方垂盆草沖劑原標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，用TLC鑒定矮地茶、HPLC法測定巖白菜素的含量，建立起復(fù)方垂盆草膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
1 儀器及試藥
1.1 儀器
日本島津LC-2010高效液相色譜儀，Lcsolution工作站，日本AND GR-202電子分析天平，超聲波清洗器(CQX25-06，50HZ，上海必能信超聲有限公司)
1.2 試藥
復(fù)方垂盆草膠囊為廣西強(qiáng)壽藥業(yè)公司提供，陰性對照品為自制；巖白菜素對照品(批號：1532-200202，供含量測定用)；均由中國藥品生物制品檢定所提供；硅膠G(青島海洋化工廠)；甲醇為色譜純，其他實(shí)試劑為AR級；水為重蒸餾水。
2 方法與結(jié)果
取本品內(nèi)容物1g，加甲醇20mL，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至1mL，作為供試品溶液；取巖白菜素對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。按同法制備得的缺矮地茶陰性對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(5∶4∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵-2%鐵氰化鉀(1∶1)的混合溶液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；缺矮地茶陰性對照品溶液，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上無相同顏色的斑點(diǎn)(見圖1)。
1 2 3 4 5
圖1 復(fù)方垂盆草膠囊薄層色譜1~3.樣品(sample)(批號：070605)，4.巖白菜素(Bergenin)，5.陰性樣品(negative sample)
3 結(jié)果
3.1 色譜條件
色譜柱：島津VP-ODS C18柱(4.6μm×250nm，5μm)；甲醇-水(20：80)為流動相；檢測波長為275nm。理論板數(shù)按巖白菜素峰計算應(yīng)不低于4000。
3.2 對照品溶液的制備
精密稱取巖白菜素對照品適量，加甲醇制成每1mL含50μg的溶液，即得。
3.3 供試品溶液的制備
取本品內(nèi)容物0.5g，精密稱定，置50mL量瓶中，加甲醇45mL，超聲處理30min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，即得。
3.4 線性關(guān)系考察
精密稱取巖白菜素對照品10.40mg，置100mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋到刻度，搖勻，作為對照品溶液(104μg/mL)。精密量取1.25、2.5、5、8mL，分別置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別作為對照品溶液(濃度分別為：83.2μg/mL、52μg/mL、26μg/mL、13μg/mL)。按3.1的色譜條件分別進(jìn)樣10μL測定。以芍藥苷對照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X)、峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果提示：進(jìn)樣量在0.13μg～1.04μg范圍內(nèi)，巖白菜素的濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系?；貧w方程為：Y=2841.5X361854(r=0.9995)。
3.5 精密度試驗
取對照品溶液(52μg/mL)，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，測定峰面積積分值，結(jié)果RSD為0.5%(n=5)。試驗結(jié)果表明，本法精密度較好。
3.6 穩(wěn)定性試驗
取同一供試品(批號070605)溶液按上述方法，每隔3h進(jìn)樣一次，共5次，測定峰面積積分值，結(jié)果RSD為0.8%(n=5)。試驗結(jié)果表明，在15h內(nèi)待測物穩(wěn)定。
3.7 重復(fù)性試驗
取同一供試品(批號070605)按上述方法測定6份，結(jié)果6份巖白菜素的平均含量為6.31mg/g，RSD=1.0%。試驗結(jié)果表明，本法重復(fù)性較好。
3.8 加樣回收試驗
精密稱取“重復(fù)性試驗”項下的復(fù)方垂盆草膠囊(批號070605)內(nèi)容物約0.25g(巖白菜素含量為6.31mg/g)，平行取樣6份，分別精密加入濃度為1.51mg/mL巖白菜素對照品溶液(精密稱定巖白菜素15.10mg置10mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。)1.0mL，按正文擬訂的方法制備供試品溶液、測定，計算回收率，結(jié)果平均回收率為98.47%，RSD=1.2%(n=6)，符合定量分析的要求。結(jié)果見表1。
3.9 陰性干擾試驗
取缺矮地茶的陰性樣品0.5g，精密稱定，按3.3供試品制備的方法制備并按3.1色譜條件測定，結(jié)果陰性對照樣品在巖白菜素峰位置無吸收峰，表明處方中的其他成分對本品含量測定無陰性干擾(見圖2)。
圖2 A巖白菜素對照品 B樣品
C陰性樣品 1 巖白菜素
3.10 樣品測定
取不同批號的樣品3批，按3.1、3.2、3.3項色譜條件及對照品和供試品溶液的制備方法檢測，并計算巖白菜素的含量，結(jié)果見表2。
4 討論
測定波長及流動相的選擇參考《中國藥典》2005年版一部“矮地茶”項下的含量測定[2]部分，所測定的成分為巖白菜素，其檢測波長為275nm，流動相為甲醇-水(20∶80)，經(jīng)試驗，結(jié)果巖白菜素與其相鄰峰的分離效果良好，故選定275nm作為檢測波長，甲醇-水(20∶80)作為流動相。
該質(zhì)量控制方法簡便可靠、精密度高、分離效果好，可用于垂盆草膠囊質(zhì)量控制。
參考文獻(xiàn)：
[關(guān)鍵詞] 活絡(luò)健骨膠囊；白芍；青風(fēng)藤；芍藥苷；薄層色譜法；高效液相色譜法
[中圖分類號]R286 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A [文章編號]1673-7210（2008）06（a）-038-02
Study on quality standards for Huoluojiangu Capsules
LEI Li-ming1，WANG Xian-jiao2，ZHOU Jia-mao1,GUO Ai-xiu1,JIANG Yun-kai1，HU Zhi-xiang1,CHEN Hai-yang1
(1.Department of Pharmacy, Hunan Environment-Biological Polytechnic，Hengyang 421005, China;2.Hengyang Institute for Drug Control,Hengyang 421001, China)
[Abstract] Objective: To establish quality standards for Huoluojiangu Capsules. Methods: Radix Paeoniae Alba and Caulis Sinomenii in Huoluojiangu Capsules were identified by TLC. The content of paeoniflorin in preperation was determined by HPLC.Results: The spots on TLC plates were clear without interference in the blank reference. The methodological study showed that a good linear correlation existed in the rang of 0.16~0.95 μg of paeoniflorin(r=0.999 7).The average recovery of paeoniflorin was98.9%(n=5) with RSD of 0.96%. Conclusion:The methods are sensitive, simple, accurate and can be used for quality control of Huoluojiangu Capsules.
[Key words] Huoluojiangu Capsules；Radix Paeoniae Alba；Caulis Sinomenii；Paeoniflorin; TLC; HPLC
活絡(luò)健骨膠囊由青風(fēng)藤、海風(fēng)藤、白芍、骨碎補(bǔ)、乳香、沒藥、全蝎、蜈蚣、土鱉等18味中藥組成。處方系治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)病的師傳經(jīng)驗秘方，經(jīng)30多年臨床實(shí)踐，吸收現(xiàn)代醫(yī)學(xué)新成果，不斷總結(jié)與改進(jìn)，形成被臨床許多病例驗證取得滿意療效的復(fù)方制劑。不僅對風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎療效較佳，對腰腿痛、坐骨神經(jīng)痛、肌肉病變、骨質(zhì)增生、股骨頭壞死及骨外傷均有較好療效[1]。藥理實(shí)驗證實(shí)具有良好的抗炎消腫[2]和鎮(zhèn)痛作用[3]，對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎中白細(xì)胞介素6及前列腺E2的生成有顯著抑制作用[4]。為了控制產(chǎn)品質(zhì)量，通過實(shí)驗研究，我們建立了青風(fēng)藤、白芍的薄層色譜鑒別方法和芍藥苷的HPLC含量測定方法[5]。
1 儀器與試藥
1.1儀器
高效液相色譜儀：Waters 717高效液相色譜儀；檢測器：Waters 2487雙波長紫外檢測器；Agilent SB-C18柱；HS2000色譜數(shù)據(jù)工作站（杭州英譜科技開發(fā)有限公司）。臺灣艾柯純水機(jī)。Mettler AG135電子分析天平。939薄層制板器（重慶南岸貝爾德儀器技術(shù)廠）。
1.2試藥
芍藥苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號：110736-200525）；活絡(luò)健骨膠囊（自制）；各味藥材購自衡陽市老百姓大藥房，均經(jīng)衡陽市藥檢所王先教副主任藥師鑒定。乙腈（色譜純）、磷酸（分析純）、水為超純水，其他試劑為分析純。
2 方法與結(jié)果
2.1 薄層鑒別
2.1.1 白芍取膠囊內(nèi)容物2 g，加甲醇10 ml，回流30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2 ml使溶解，作為供試品溶液。另取白芍藥材1 g，加甲醇5 ml，回流提取30 min，提取液濾過作為對照藥材溶液。再取不含白芍的處方樣品照供試品溶液的制備方法，制備空白樣品溶液。按照《中國藥典》附錄ⅥB薄層色譜法試驗，吸取上述3種溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（20∶5∶10∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，隨即觀察，在供試品色譜中，與白芍對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，分別顯相同的藍(lán)紫色斑點(diǎn)，空白樣品無干擾。
2.1.2 青風(fēng)藤取膠囊內(nèi)容物2 g，加乙醇10 ml，回流30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇2 ml使溶解，作為供試品溶液。另取青風(fēng)藤藥材2 g，加乙醇10 ml，回流提取30 min，提取液濾過作為對照藥材溶液。再取不含青風(fēng)藤的處方樣品照供試品溶液的制備方法，制備空白樣品溶液。按照《中國藥典》附錄ⅥB薄層色譜法試驗，吸取上述3種溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以濃氨水飽和20 min，再以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-氨水（2∶4∶2∶0.5）為展開劑，展開，展距10 cm，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀溶液，在供試品色譜中，與青風(fēng)藤對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，分別顯相同的橙紅色斑點(diǎn)，空白樣品無干擾。
2.2 含量測定
2.2.1色譜條件Agilent SB C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm)。柱溫：30℃。流速1.4 ml/min。流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（13∶87）。檢測波長：230 nm。進(jìn)樣量：10 μl，理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計算應(yīng)不低于2 000。
2.2.2 對照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對照品適量，加甲醇制成67.6 μg/ml的溶液，即得。
2.2.3 供試溶液的制備取本品10粒（約5 g），研細(xì)，置100 ml量瓶中，加甲醇適量，回流30 min，濾過至100 ml量瓶中，加甲醇至刻度，再精密量取2.0 ml至100 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。
2.2.4 陰性對照試驗取不含白芍的處方，按制備工藝制成缺白芍的陰性對照品，再按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。精密吸取10 μl注入液相色譜儀，按上述方法測定，結(jié)果表明陰性對照品的色譜圖在芍藥苷相應(yīng)的保留時間無干擾峰（見圖1）。
（A：芍藥苷對照品;B:活絡(luò)健骨膠囊供試品;C:缺白芍的陰性供試品）
2.2.5 線性關(guān)系考察精密稱取芍藥苷對照品適量，加甲醇制成濃度分別為15.86，31.72，47.58，63.44，79.30，95.16 μg/ml的溶液，分別精密吸取上述各對照品溶液10 μl，注入液相色譜儀，測定。以對照品溶液進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程Y＝1.97×106X＋2.92×105，r＝0.999 7。表明芍藥苷進(jìn)樣量在0.16~0.95 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。
2.2.6 精密度試驗精密吸取同一對照品溶液10 μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，結(jié)果RSD為1.19%。
2.2.7 穩(wěn)定性試驗分別取同一放置0，4，8，12，24 h的供試品溶液和對照品溶液進(jìn)樣測定，對照品峰面積的RSD為0.89%，供試品的芍藥苷峰面積RSD為2.13%，說明芍藥苷在24 h內(nèi)穩(wěn)定。
2.2.8 重復(fù)性試驗對同一批樣品按上述的含量測定方法進(jìn)行6次平行提取測定，計算含量，結(jié)果表明，供試品的芍藥苷峰面積RSD為1.33%。說明方法重復(fù)性良好。
2.2.9 回收率試驗精密量取芍藥苷對照品溶液適量，加入到已知芍藥苷含量的的復(fù)方活絡(luò)健骨膠囊中，按供試品含量測定項下方法操作，制備供試品溶液，測定芍藥苷的含量，計算回收率。芍藥苷平均回收率為98.9%(n=5)，RSD為0.96%（表1）。
2.2.10樣品測定結(jié)果按上述方法測定樣品3批，樣品含量見表2，含量均在1.550 mg/粒以上。
3討論
活絡(luò)健骨膠囊處方中的藥味較多，給其中藥味的薄層鑒別帶來較大的困難，通過大量的薄層條件和樣品的前處理方法的摸索試驗，得出了薄層效果較好、重復(fù)性好的青風(fēng)藤、白芍的薄層條件，并對幾批樣品進(jìn)行了鑒別。結(jié)果表明，這兩味藥材的薄層色譜鑒別方法良好，可作為活絡(luò)健骨膠囊質(zhì)量控制的方法之一。
活絡(luò)健骨膠囊中青風(fēng)藤和白芍的用藥量最大，本研究選擇芍藥苷作為含量測定的指標(biāo)。在供試品的制備過程中，采用了比較成熟的回流提取方式，操作簡便。經(jīng)方法學(xué)研究驗證，采用高效液相色譜法對處方中的芍藥苷進(jìn)行含量測定，操作簡便、結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，具有專屬性，能夠有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量，可作為活絡(luò)健骨膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測定的方法。
[參考文獻(xiàn)]
[1]周家茂，吳石頭.復(fù)方活絡(luò)健骨膠囊治療坐骨神經(jīng)痛58例臨床研究[J].中華實(shí)用醫(yī)藥雜志，2005，5(11):1077.
[2]周家茂，嚴(yán)奉祥，全建設(shè)，等.活絡(luò)健骨膠囊抗炎效應(yīng)的實(shí)驗研究[J].中國醫(yī)師雜志，2006，8(5):631.
[3]周家茂，嚴(yán)奉祥，全建設(shè)，等.活絡(luò)健骨膠囊鎮(zhèn)痛試驗的藥效學(xué)研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2006，13(4):25.
[4]周家茂，嚴(yán)奉祥，雷黎明，等.活絡(luò)健骨膠囊對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的抗炎免疫效應(yīng)[J].中國臨床康復(fù)，2006，10(27):48.
[5]閻向東，裴林，李延昌.健骨蠲痛膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[J].中國實(shí)驗方劑學(xué)雜志，2007，13(2):4.
【關(guān)鍵詞】 肝泰片 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 沒食子酸 高效液相色譜
肝泰片是由珠子草、黃芪、甘草等幾味中藥組成的復(fù)方制劑，具有舒肝利膽，清熱解毒，扶正祛邪之功效，臨床上用于乙型和丙型肝炎的治療，取得了較好的療效。為了增強(qiáng)對其質(zhì)量的可控性，我們制訂了對方中珠子草、甘草薄層鑒別方法，并采用HPLC法對珠子草所含沒食子酸進(jìn)行了含量測定。實(shí)驗結(jié)果表明，本方法簡便，專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，可有效控制該制劑的質(zhì)量。
1 儀器與試藥
島津LC-10AVP高效液相色譜儀（包括SPD-10AVP二極管陣列檢測器，LC-10AT二元泵）；FA2004N電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；珠子草、甘草對照藥材（中國藥品生物制品檢定所）；沒食子酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：0831-9501）；肝泰片（我院自制制劑，批號20050201，20050412，20050608）；硅膠G薄層板(青島海洋化工廠)；CQX25-12超聲波清洗器（上海必能信超聲有限公司）；甲醇（色譜純），重蒸水，其它試劑均為分析純。
2 方法與結(jié)果
2.1 珠子草的薄層鑒別取本品內(nèi)容物約1 g，加甲醇10 ml，超聲處理10 min，過濾，濾液作為供試品溶液。另取珠子草對照藥材0.5 g，加甲醇10 ml，如上法操作，濾液作為對照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2005年版Ⅰ部附錄ⅥB）試驗，吸取上述溶液各5 μl，分別點(diǎn)于硅膠G薄層板上，以環(huán)已烷－氯仿－醋酸乙酯(20∶5∶5)上行展開、取出、揮干溶劑，噴10％硫酸乙醇溶液，105℃烘5 min，日光下檢視，樣品供試液色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上有相同顏色的斑點(diǎn)，見圖1。陰性對照液無干擾。
2.2 甘草的薄層鑒別取本品內(nèi)容物約1 g，加稀乙醇10 ml，超聲提取15 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。另取甘草對照藥材0.2 g，同法制成對照藥材溶液，照薄層色譜法（《中國藥典》2005年版Ⅰ部附錄ⅥB）試驗，吸取上述兩種溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸（12∶4∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，見圖2。陰性對照液無干擾。
2.3 珠子草中沒食子酸的含量測定
2.3.1 色譜條件 ODS C18分析柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）； 檢測波長:270 nm；流動相:A 甲醇，B 0.1%磷酸水溶液，梯度洗脫條件：0～15 min，A-B（10:90），15～17 min，A-B（90:10），17～35 min，A-B（10:90）；流速1.0 ml·min-1； 柱溫室溫；進(jìn)樣量20μl。理論塔板數(shù)按沒食子酸對照品計算大于5 000。
2.3.2 供試品溶液的制備 取本品30片，除去包衣，研細(xì)，精密稱定，求得平均裝量后，混勻，精密稱取內(nèi)容物適量（約500 mg），置25 ml容量瓶中，加入30%甲醇溶液約25 ml，稱定重量，加熱回流2 h，放冷，用30%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液再經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾后，即得。
2.3.3 對照品溶液的制備 精密稱取減壓干燥至恒重的沒食子酸對照品，加30%甲醇制成41.6 μg·ml-1的對照品溶液。
2.3.4 陰性對照溶液的制備 取不含珠子草的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制得陰性對照溶液。精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照液各20 μl，分別注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定，結(jié)果陰性對對照在沒食子酸相應(yīng)的保留時間處無干擾，色譜圖見圖3。
1.沒食子酸對照品 2.陰性對照品 3.肝泰片樣品
圖3 高效液相色譜圖
2.3.5 線性關(guān)系的考察 分別精密吸取上述沒食子酸對照品溶液0.1， 0.2， 0.25，0.5，0.75，1.0 ml ，分別置25 ml容量瓶中，用30%甲醇稀釋至刻度，搖勻，各進(jìn)樣20 μl，依次注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積積分值，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，對照品進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=62 059.84X-35 650.77，r=0.999 9(n=6），結(jié)果表明沒食子酸在4.16～41.6 μg濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。
2.3.6 穩(wěn)定性實(shí)驗 取供試品溶液，分別于配制后0，2，4，8，12 h，依樣品測定法測定，結(jié)果其峰面積積分值的RSD=0.90%，可見供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。
2.3.7 精密度實(shí)驗 精密吸取“2.3”項下對照品溶液20 μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定其峰面積的RSD=0.60%。
2.3.8 重復(fù)性實(shí)驗 取同一批號肝泰片，平行制備5份樣品，按樣品測定法測定，結(jié)果每片含沒食子酸平均值為3.812 4 mg(RSD=0.65%，n=5)。
2.3.9 加樣回收率實(shí)驗 精密稱取已知含量的同一批樣品0.1 g，精確加入沒食子酸對照品溶液適量(2.33 μg·ml-1)，按樣品溶液的制備方法操作，測定其含量，并計算平均回收率為100.31%，RSD=0.69%(n=5)。
2.3.10 樣品測定 按樣品測定方法測定3批樣品，測定結(jié)果見表1。表1 樣品含量測定結(jié)果
3 討論
【關(guān)鍵詞】 三參膠囊；，，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；，，薄層色譜；，，高效液相色譜
摘要：目的建立三參膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜法對丹參、人參、制首烏進(jìn)行了定性鑒別，采用反相高效液相色譜（RP-HPLC）法測定了膠囊中丹參素鈉的含量，采用Shimpack VP－ODS C18柱（5 μm，150 mm×4.6 mm）；檢測波長280 nm；流動相：0.5%冰醋酸-甲醇（94∶6）；流速：1.0 ml?min-1；柱溫：30℃。結(jié)果此法線性范圍0.110 9～1.663 5μg，r=0.999 9；丹參素鈉的平均回收率為98.82%（RSD=1.45%，n=5）。結(jié)論該方法穩(wěn)定、可靠，可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。
關(guān)鍵詞：三參膠囊； 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)； 薄層色譜； 高效液相色譜
Abstract：Objective To develop a quality standard for Sanshen capsule. MethodsTLC was used to identify the ingredients such as Danshen Root Ginseng Root and Tuber Fleeceflower Root respectively . Meanwhile， the content of Danshensu in Sanshen capsule was determined by RPHPLC with Shim-pack VP－ODS C18（5 μm，150 mm×4.6mm） .The detection wavelength was 280 nm；0.5%Acetic acid-Methanol（94∶6）was used as mobile phase， the rate of 1.0 ml?min-1and the column temperature was at 30℃.ResultsThe method was linear within the range of 0.110 9～1.663 5 μg，（r=0.999 9）. The average recovery of Danshensu was 98.82%，（RSD＝1.45%，n=5）.ConclusionThe method is accurate，reliable，and can be used for quality control of the production.
Key words：Sanshen capsule; Quality standard; TLC； HPLC
三參膠囊由丹參、三七、人參、制首烏等8味藥組成，此方屬于醫(yī)院臨床經(jīng)驗方，為更好發(fā)揮本方療效，滿足臨床不斷擴(kuò)大的需求，現(xiàn)按中藥新藥6類注冊要求研制開發(fā)，制成膠囊劑。本方功能主治為破瘀消，扶正祛邪。臨床用于治療氣滯血瘀型及氣虛血瘀型肺癌為主的惡性腫瘤。本文對方中丹參、制首烏、人參、三七進(jìn)行了薄層色譜鑒別研究；采用RPHPLC法測定方中主藥丹參中丹參素鈉的含量，研究的方法簡便、快速、重復(fù)性好，可作為本品質(zhì)量控制方法?，F(xiàn)報道如下：
1 儀器與試藥
島津LC10ATvp液相色譜儀，SPDM10Avp檢測器，浙江大學(xué)2010色譜工作站；sartoriusBP211D電子天平（感量0.1 mg；0.01 mg，載量210 g；80 g）；autoscienceAS5150A超聲波清洗器；TGL-16G高速離心機(jī)；939全自動薄層制板器，ZF90型暗箱紫外透射儀（上海顧村電光儀器廠）。丹參素鈉（110855200304，供含量測定用），中國藥品生物制品檢定所提供。丹參酮ⅡA（0766200213），中國藥品生物制品檢定所提供。人參二醇（0701200109，供鑒別用），中國藥品生物制品檢定所提供。人參三醇（0702200009，供鑒別用），中國藥品生物制品檢定所提供。何首烏對照藥材（09349704），中國藥品生物制品檢定所提供。三參膠囊，批號20030401，20030402，20030403；硅膠G由青島海洋化工廠生產(chǎn)，水為重蒸餾水；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。所有藥材均購于市場，經(jīng)檢驗均符合《中國藥典》2000年版Ⅰ部各藥材項下的規(guī)定。
2 方法與結(jié)果
2.1 定性鑒別
2.1.1 丹參的薄層色譜鑒別［11］取本品2.5 g，加乙醚10 ml，超聲處理10 min，濾過，殘留物備用，濾液揮干，殘渣加醋酸乙酯適量使溶解，作為供試品溶液。另取丹參酮ⅡA對照品，加醋酸乙酯制成每毫升含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2000版Ⅰ部附錄VIB）試驗，吸取上述兩種溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯（19∶1）為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，見圖1a。
2.1.2 制首烏的薄層色譜鑒別［2~3］
取本品2.5 g，加甲醇50 ml，超聲處理15 min，濾過，濾液水浴揮干，殘渣加水10 ml使溶解，再加鹽酸2 ml，置水浴上加熱回流30 min，立即冷卻，用乙醚提取兩次，20 ml/次，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇2 ml使溶解，作為供試品溶液。另取何首烏對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2000版Ⅰ部附錄VIB）試驗，吸取上述兩種溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸（15∶2∶1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，見圖1b。再置氨蒸氣中熏數(shù)分鐘后，日光下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，見圖1c。
2.1.3 人參、三七的薄層色譜鑒別 取本品5 g，加7％硫酸溶液100 ml，置水浴上加熱回流1 h，放冷，用石油醚（30～60℃）振搖提取3次，50 ml/次，合并石油醚液，揮干，殘渣加0.5 ml無水乙醇使溶解，作為供試品溶液。另取人參二醇、人參三醇對照品，加無水乙醇制成每毫升各含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2000版Ⅰ部附錄VIB）試驗，吸取上述供試品溶液10 μl，對照品溶液5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿乙醚（1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，見圖1d。
圖1 丹參、制首烏、人參、三七的薄層色譜鑒別（略）
2.2 含量測定［4］
2.2.1 色譜條件 Shimpack VPODS C18柱（5 μm，150 mm×4.6 mm）；流動相：0.5％冰醋酸甲醇（94∶6）；流速：1.0 ml?min-1；檢測波長280 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10 μl。
2.2.2 對照品溶液的制備精密稱取丹參素鈉對照品適量，加水制成每毫升含0.1 mg的溶液，即得。
2.2.3 樣品溶液制備 取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取0.5 g，精密稱定，置25 ml量瓶中，加水約20 ml，超聲處理（功率150 W，頻率50KHz）30 min，取出，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液離心，即得。
2.2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗
取樣品溶液10 μl，注入高效液相色譜儀測試，丹參素鈉的保留時間為10 min左右，理論板數(shù)以丹參素鈉峰計大于3 000，丹參素鈉峰與相鄰峰分離度大于1.5。見圖2b。
2.2.5 線性關(guān)系考察
精密稱取丹參素鈉對照品適量，加水制成每毫升含丹參素鈉0.110 9 mg 的溶液，搖勻，作為對照品溶液，分別精密吸取對照品溶液1，2，4，8，15 μl，進(jìn)樣測定。分別以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)（X），峰面積（A）為縱坐標(biāo)（Y）作圖，進(jìn)行回歸分析。丹參素鈉回歸方程為：Y=4.634 1×102+9.813 17×105X，相關(guān)系數(shù)：r=0.999 9。結(jié)果表明丹參素鈉進(jìn)樣量在0.110 9～1.663 5 μg范圍內(nèi)與峰面積呈很好的線性關(guān)系。
2.2.6 陰性對照實(shí)驗
按處方制備缺丹參的陰性樣品。依照“2.2”項下方法制成陰性樣品溶液。取供試品溶液、對照品溶液（每毫升含丹參素鈉0.110 9 mg）、陰性樣品溶液各10 μl注入液相色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)行測定，測定結(jié)果為供試品溶液在與對照品溶液相同位置的地方出峰，且分離效果較好，缺丹參陰性樣品溶液無干擾。結(jié)果見圖2。
2.2.7 精密度實(shí)驗 精密吸取對照品溶液（每毫升參素鈉0.110 mg）10 μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，結(jié)果丹參素鈉平均峰面積為1 145 667，RSD=0.44%。
2.2.8 重復(fù)性實(shí)驗
取同一批號樣品5份，按樣品測定方法測定，結(jié)果樣品中丹參素鈉的平均含量為5.79 mg?g-1，RSD=0.698%表明本法重復(fù)性良好。
2.2.9 穩(wěn)定性實(shí)驗 取同一批號的樣品適量，按依照“2.2.3”項下方法制成供試品溶液，于室溫下保存，按上述色譜條件測定方法于制備完成后放置不同時間精密吸取10 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，考察其穩(wěn)定性，結(jié)果供試品平均峰面積為1 285 530.7，RSD=1.82%。可知樣品溶液在16 h內(nèi)穩(wěn)定。
2.2.10 加樣回收實(shí)驗 精密稱取丹參素鈉對照品適量，加水制成每毫升含丹參素鈉0.110 9 mg的溶液，精密稱取樣品（丹參素鈉含量為5.79 mg?g-1）適量，5份，分別精密加入丹參素鈉對照品溶液（C＝1.086 mg?ml-1）1.5 ml，再分別加甲醇20 ml，按樣品含量測定方法測定，計算回收率。丹參素鈉的平均回收率為98.82%，RSD=1.45%。結(jié)果見表1。
圖2 對照品（a）、樣品（b）、陰性樣品（c）色譜圖（略）
表1 丹參素鈉含量測定加樣回收率實(shí)驗結(jié)果（略）
2.2.11 樣品測定
取樣品3批，分別按依照“2.2.3”項下方法制成供試品溶液；精密稱取丹參素鈉對照品適量，加水制成每毫升參素鈉0.110 9 mg的溶液，作為對照品溶液。分別吸取供試品溶液和對照品溶液各10 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果見表2。
表2 樣品含量測定結(jié)果（略）
*為每粒中平均含量
3 討論
3.1 關(guān)于薄層鑒別 采用以上方法對三參膠囊進(jìn)行薄層色譜鑒別，重現(xiàn)性好，陰性實(shí)驗無干擾，經(jīng)多批樣品鑒別，均能檢出與對照相同的斑點(diǎn)。同時我們也對方中莪術(shù)、土鱉蟲的薄層色譜鑒別進(jìn)行了研究，結(jié)果分離效果不好，且陰性有干擾，故未收入正文。
3.2 檢測波長的選擇 取丹參素鈉對照品溶液及陰性溶液，分別進(jìn)行紫外掃描（190～370 nm），丹參素鈉峰在280 nm波長處均有最大吸收，而陰性對照的吸收較小，故選擇280 nm作為檢測波長。
3.3 提取溶劑的考察 曾分別用乙醇、稀乙醇、甲醇、水作為提取溶劑進(jìn)行考察，丹參素鈉含量分別為5.21，4.26，4.63，5.98 mg?g-1，結(jié)果以水為提取溶劑時，丹參素鈉的含量最高，故選擇水為提取溶劑。
3.4 提取時間的考察 取同批樣品內(nèi)容物，研細(xì)，取0.5 g，3份，精密稱定，置25 ml量瓶中，分別加水20 ml，超聲處理（150w，50kHz）15，30，45 min，進(jìn)行測定，結(jié)果丹參素鈉的含量分別為4.22，5.98，5.99 mg?g-1。超聲處理30 min后含量幾無變化，試驗選擇提取時間為30 min。
參考文獻(xiàn)
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【關(guān)鍵詞】 大黃；黃芩；薄層鑒別；質(zhì)量控制
石黃清火丸是我院老中醫(yī)的協(xié)定處方，經(jīng)過多年臨床應(yīng)用，療效滿意，為方便患者服用，制成濃縮水丸。本方由大黃、黃芩、石膏、板藍(lán)根、薄荷、苦杏仁(炒)、萊菔子(炒)等多味中藥組成；具有清熱瀉火，宣肺止咳的功效。主治肺胃濕熱型口舌生瘡，牙痛，感冒初期。為控制產(chǎn)品質(zhì)量，本文研究建立了大黃、黃芩的薄層定性鑒別。
1 儀器與試藥
石黃清火丸由本院制劑室提供，批號：20090309、20090712、20100507；薄層板自制；硅膠G(青島海洋化工有限公司制造)；其余試劑均為分析純；大黃對照藥材及黃芩對照品均由中國藥品生物制品檢定所提供。
2 薄層色譜鑒別
2.1 大黃的薄層色譜鑒別 ［1-2］
取本品內(nèi)容物10 g，加甲醇20 ml，超聲處理30 min,冷卻，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20 ml使溶解，再加鹽酸1 ml，置水浴中加熱回流30 min,立即冷卻，用乙醚振搖提取2次，每次20 ml,合并乙醚液，揮干，殘渣加甲醇2 ml使溶解，作為供試品溶液。另取大黃對照藥材0.1 g，同上法制成對照藥材溶液。按處方工藝去大黃制成樣品，照供試品溶液的制備方法制成陰性樣品溶液。吸取供試品溶液、對照藥材溶液、去大黃陰性樣品溶液各5 ul,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30℃-60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的五個橙黃色熒光斑點(diǎn)；置氨蒸氣中熏后，在日光下檢視，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色。陰性樣品溶液無相應(yīng)的斑點(diǎn)。見圖1.
2.2 黃芩的薄層色譜鑒別 ［3-4］
取本品10 g，研碎，加乙酸乙酯-甲醇(3∶1)的混合溶液30 ml,加熱回流30 min，放冷濾過，慮液水浴蒸干，殘渣加甲醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芩甙對照品，加甲醇制成每1 ml含1的溶液，作為
作者單位：455000河南省安陽市中醫(yī)院
對照品溶液。按處方工藝去黃芩制成樣品，照供試品溶液的制備方法制成陰性樣品溶液。吸取供試品溶液、對照品溶液、去黃芩陰性樣品溶液各5 ul,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5∶5∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性樣品溶液無相應(yīng)的斑點(diǎn)，見圖1。
圖1
石黃清火丸TLC圖
3 討論
采用薄層色譜法對石黃清火丸中大黃、黃芩進(jìn)行定性鑒別。色譜斑點(diǎn)清晰，附近無雜質(zhì)斑點(diǎn)干擾，專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，本方法可作為石黃清火丸的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。
參 考 文 獻(xiàn)
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[關(guān)鍵詞] 鼻炎膠囊；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；馬兜鈴酸A；細(xì)辛；白芷；川芎
[中圖分類號] R284.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2014）01（b）-0008-03
鼻炎膠囊由蒼耳子、白芷、川芎、、細(xì)辛等九味藥材組成，經(jīng)提取制成的中藥復(fù)方制劑，具有祛風(fēng)宣肺、清熱解毒等功效，用于治療急慢性鼻炎。為了有效監(jiān)測該制劑的產(chǎn)品質(zhì)量，本實(shí)驗采用TLC法對制劑中的川芎和白芷進(jìn)行定性鑒別；另細(xì)辛為本方的主要成分之一，為了控制其毒副作用，本文采用HPLC法對制劑中馬兜鈴酸A的含量進(jìn)行檢查，為該制劑的質(zhì)量控制提供理論依據(jù)。
1 儀器與試藥
Waters2695-2998型高效液相色譜儀；馬兜鈴酸A對照品、川芎對照藥材和白芷對照藥材，均購自中國藥品生物制品檢定所，批號分別為110746-200305， 120918-200608和120945-200406，甲醇為色譜純，水為重蒸水；硅膠G購自青島海洋化工有限公司。
2 方法與結(jié)果
2.1 川芎的薄層鑒別
取本品適量，傾倒出內(nèi)容物，稱取約8 g，置燒瓶中，加入乙醚約50 ml，水浴加熱回流提取，時間約為1 h，提取液濾過，回收濾液至干，殘渣加乙醚2 ml使溶解，作為供試品溶液。另制備缺川芎陰性樣品，取缺川芎陰性樣品5 g，同法制成缺川芎陰性對照溶液。再取川芎對照藥材1 g，同法制成川芎對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各6 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（30～60℃）-二氯甲烷（1∶9）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與川芎對照藥材色譜相同的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，與缺川芎陰性樣品相比較，陰性無干擾（圖1）。
2.2 白芷的薄層鑒別
取本品適量，傾倒出內(nèi)容物，稱取約5 g，置三角燒瓶中，加入乙醚30 ml，密塞，輕輕振搖，放置1 h，提取液濾過，回收濾液至干，殘渣加乙酸乙酯2 ml使之溶解，作為供試品溶液。另制備缺白芷陰性樣品，取缺白芷陰性樣品5 g，同法制成缺白芷陰性對照溶液。再取白芷對照藥材0.5 g，同法制成白芷對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各10 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（30～60℃）-乙醚（3∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與白芷對照藥材色譜相同的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，與缺白芷陰性樣品相比較，陰性無干擾（圖2）。
2.3 馬兜鈴酸A含量檢查
2.3.1 色譜條件 Kromasil C18色譜柱（4.6 mm×200 mm，5 μm）；以甲醇-1%冰乙酸（60∶40）為流動相；流速為1.0 ml/min；檢測波長250 nm；柱溫30℃，理論塔板數(shù)按馬兜鈴酸A峰計算，不低于2000。
2.3.2 供試品溶液的制備 取本品適量，傾倒出內(nèi)容物，精密稱取5 g，置燒瓶中，加入甲醇80 ml，水浴加熱回流提取，提取時間為2 h，提取液濾過，接取濾液，回收濾液至干，殘渣加10%氨水20 ml溶解，用乙醚提取3次，每次20 ml，棄去乙醚層，水層滴加稀鹽酸，至pH 3～4，再加入乙醚20 ml，分取乙醚層，共提取3次，合并乙醚液，回收乙醚至干，殘渣加甲醇1 ml使之溶解，即為供試品溶液。
2.3.3 對照品溶液的制備 取馬兜鈴酸A對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 毫升中含馬兜鈴酸A 0.022 mg的溶液。
2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及線性范圍的考察 取上述馬兜鈴酸A對照品溶液，精密量取2、4、6、8、10 ml，分別置10 ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，配制成濃度為0.0044、0.0088、0.0132、0.0176、0.022 mg/ml的溶液，吸取上述系列濃度的對照品溶液10 μl，注入高效色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)行測定。以測得的色譜峰積分面積為縱坐標(biāo)，以對照品的濃度含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，得線性回歸方程Y=2.3183×104X+0.9281×103（r=0.9999），測得馬兜鈴酸A對照品線性范圍為0.044～0.22 μg。
2.3.5 精密度試驗 取上述馬兜鈴酸A對照品溶液（濃度為0.022 mg/ml），精密吸取5 μl，注入高效色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)行測定，重復(fù)測定6次，以所得色譜峰峰面積計算RSD為0.23%，表明儀器的精密度良好。
2.3.6 穩(wěn)定性試驗 取上述馬兜鈴酸A對照品溶液（濃度為0.022 mg/ml），精密吸取5 μl，分別于0、2、4、6、8、10、12 h注入高效色譜儀，進(jìn)行測定，按上述色譜條件進(jìn)行測定，以所得色譜峰峰面積計算RSD為1.52%，表明樣品中的馬兜鈴酸A在12 h內(nèi)測定，含量穩(wěn)定。
2.3.7 最低檢出限 取上述馬兜鈴酸A對照品溶液（濃度為0.022 mg/ml），精密吸取1 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取20 μl，注入高效色譜儀，進(jìn)行測定。從20 μl起依次遞減進(jìn)樣量，并記錄各色譜圖，結(jié)果表明當(dāng)進(jìn)樣量達(dá)2 μl時，色譜圖信噪比為3∶1，確定最低檢出量為2 μl，即含馬兜鈴酸A對照品為1.76 ng。
2.3.8 細(xì)辛藥材及樣品的馬兜鈴酸A含量測定 取3批樣品按2.3.2項下的方法制備供試品溶液。細(xì)辛藥材溶液的制備：取細(xì)辛藥材，精密稱取0.2 g，置燒瓶中，加入甲醇20 ml，水浴加熱回流提取，提取時間為2 h，提取液濾過，接取濾液，回收濾液至干，殘渣加10%氨水10 ml溶解，用乙醚提取3次，每次10 ml，棄去乙醚層，水層滴加稀鹽酸，至pH 3～4，再加入乙醚15 ml，分取乙醚層，共提取3次，合并乙醚液，回收乙醚至干，殘渣加甲醇1 ml使溶解，即得。分別精密吸取馬兜鈴酸A對照品溶液（濃度為0.022 mg/ml） 5 ml、細(xì)辛藥材溶液和供試品溶液各10 ml，注入液相色譜儀，測定色譜圖見圖3～5。對兩批細(xì)辛藥材進(jìn)行檢測，其馬兜鈴酸A含量為34.3 μg/g，并對三批樣品進(jìn)行檢測，未檢出馬兜鈴酸A（表1）。
3 討論
本研究對鼻炎膠囊制劑中各味藥進(jìn)行了TLC定性鑒別，通過試驗，確定了川芎、白芷的薄層鑒別方法。該方法專屬性強(qiáng)，陰性對照無干擾，可以作為該制劑的鑒別方法。川芎鑒別實(shí)驗參考藥典[1]進(jìn)行鑒別，實(shí)驗過程中發(fā)現(xiàn)陰性對照有干擾。因此，參照文獻(xiàn)[2-4]進(jìn)行了反復(fù)實(shí)驗，最后確定展開劑為石油醚（30～60℃）-二氯甲烷（1∶9），展開效果最好。白芷薄層鑒別參照藥典[1]進(jìn)行實(shí)驗，展開效果好，斑點(diǎn)清晰。
馬兜鈴酸是細(xì)辛、關(guān)木通等馬兜鈴科植物中的一類硝基菲羧酸類化合物，主要由馬兜鈴酸A、B、C、D、E及其衍生物組成[5-6]。臨床關(guān)于馬兜鈴酸腎損害的報道不斷出現(xiàn)，“馬兜鈴酸腎病”也得到醫(yī)藥界的廣泛關(guān)注[7-8]。研究表明，馬兜鈴酸作用部位在腎小管上皮細(xì)胞和腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞，其毒性機(jī)制主要是導(dǎo)致腎小管上皮細(xì)胞的變性、壞死和凋亡， 加速腎間質(zhì)纖維化進(jìn)程，降低腎小球濾過率，引起腎衰竭等[9-11]。為有效控制馬兜鈴酸的腎毒性，有學(xué)者采用HPLC法對藥材中馬兜鈴酸A進(jìn)行了測定[12-14]，參照上述文獻(xiàn)方法，本文采用HPLC法測定鼻炎膠囊中馬兜鈴酸A的含量，來控制制劑的安全性。測定結(jié)果表明，細(xì)辛藥材中馬兜鈴酸A的含量甚微，約為34.29 μg/g，含細(xì)辛藥材的三批鼻炎膠囊樣品中均未檢出馬兜酸A。
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作者單位：411102 湖南省湘潭職業(yè)技術(shù)學(xué)院（陳丹）；湖南省中醫(yī)藥研究院（李柯，李若存）
通訊作者：陳丹
【摘要】 目的 建立活血促愈膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 采用薄層色譜法對處方中的丹參、槐米、三七、積雪草進(jìn)行鑒別；用高效液相色譜法對成品中人參皂苷Rg1進(jìn)行含量測定。結(jié)果 薄層色譜中能檢出丹參、槐米、三七、積雪草；人參皂苷Rg1在2.26～13.56 μg范圍呈良好的線性關(guān)系，r0.9998，平均回收率為97.22%，RSD為1.42%。結(jié)論 所建立的方法能夠用于本品的質(zhì)量控制。
【關(guān)鍵詞】 活血促愈膠囊； 薄層色譜法； 人參皂苷Rg1； 高效液相色譜法
Study on quality standard for Huoxue Cuyu Capsule CHEN Dan*，LI Ke，LI Ruo-cun.*Xiangtan Vocational Technical College,Xiangtan 411102,China
【Abstract】 Objective To establish quality standards for Huoxue Cuyu Capsule.Methods Radix et Rhizoma Salviae,Flos Sophorae,Radix et Rhizoma Notoginseng,Herba Centellae were identified by TLC;Ginsenoside Rg1 was determined by HPLC.Results Radix et Rhizoma Salviae,Flos Sophorae,Radix et Rhizoma Notoginseng,Herba Centellae were detected by TLC;Ginsenoside Rg1 in the range of 2.26-13.56 μg was a good linear relationship,r0.9998;The average recovery was 97.22%,and RSD was 1.42%.Conclusion The established methods can be used for the quality control of Huoxue Cuyu Capsule.
【Key words】 Huoxue Cuyu Capsule; Thin layer chromatography; Ginsenoside Rg1; High performance liquid chromatography
活血促愈膠囊是由丹參、槐米、三七、積雪草組方研制而成的中藥6類新藥，功能為活血化瘀、涼血消腫、通絡(luò)止痛，用于急性軟組織損傷，中醫(yī)辨證屬血瘀證者。為了有效地控制其質(zhì)量，筆者采用薄層色譜法對制劑中的丹參、槐米、三七、積雪草進(jìn)行了鑒別，采用高效液相色譜法對三七的人參皂苷Rg1進(jìn)行了含量測定?，F(xiàn)報道如下。
1 儀器與試劑
LC-10A高效液相色譜儀（日本島津）；C18（Column 200×4.6 mm，5 μ）色譜柱（大連依利特分析儀器有限公司）；N2000數(shù)據(jù)處理軟件（浙江大學(xué)智能信息工程研究所）。羥基積雪草苷（批號：1110893-200201）、積雪草苷（批號：110892-200403）、蘆丁對照品（批號：0080-9504）、丹參酮ⅡA、（ 批號：0766-200010）、三七皂苷R1 （批號：110745-200415）、人參皂苷Rg1 （批號：110703-200726）、人參皂苷Rb1 （批號：704-200114）均為中國藥品生物制品檢定所提供。甲醇、乙腈（色譜純試劑，天津科密歐化學(xué)試劑有限公司），水為重蒸餾水，其它試劑均為分析純（為湖南匯虹試劑有限公司提供）?；钛儆z囊（批號：20080401、20080405、20080409）由湖南省中醫(yī)藥研究院中藥研究所制劑室提供。
2 薄層色譜鑒別
2.1 丹參鑒別 取三批樣品各1.0 g，加甲醇25 ml，超聲處理30 min，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加水15 ml使溶解，溶液置分液漏斗中，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次15 ml，分取乙酸乙酯層（水層備用），蒸干，殘渣加乙酸乙酯1 ml使溶解，作為供試品溶液。另取丹參酮ⅡA對照品，加乙酸乙酯制成每1 ml含2 mg的溶液，作為對照品溶液。取除丹參外的其余處方量藥材，按制備工藝方法制備缺丹參的陰性樣品，按上述供試品溶液制備方法制成缺丹參的陰性溶液照。照薄層色譜法（中國藥典2005年版一部附錄Ⅵ B）試驗，吸取上述三種溶液各10 μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯（19∶1）為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾。
2.2 槐米的鑒別 取丹參鑒別項下的水層，加水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次15 ml，分取正丁醇層，加氨試液振搖提取2次，每次15 ml，合并氨試液層（正丁醇層備用），蒸干，殘渣加甲醇5 ml使溶解，作為供試品溶液。另取蘆丁對照品，加甲醇制成每1 ml含4 mg的溶液，作為對照品溶液。取除槐米外的其余處方量藥材，按制備工藝方法制備缺槐米的陰性樣品，按上述供試品溶液制備方法制成缺槐米的陰性溶液。照薄層色譜法（中國藥典2005年版一部附錄Ⅵ B）試驗，吸取上述三種溶液各10 μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-水（8∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，待乙醇揮干后，分別置日光及紫外光燈（365 nm）下檢視，陰性無干擾。
2.3 三七、積雪草的鑒別 取槐米鑒別項下的正丁醇層，用正丁醇飽和的水洗滌二次，每次15 ml，分取正丁醇層，蒸干，殘渣加甲醇2 ml使溶解，搖勻，作為供試品溶液。另取人參皂苷Rg1對照品、三七皂苷R1對照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的混合溶液，作為對照品溶液。再取積雪草苷對照品及羥基積雪草苷對照品，加甲醇制成1 ml含1 mg的混合溶液，作為對照品溶液。取除三七外的其余處方量藥材，按制備工藝方法制備缺三七的陰性樣品，按上述供試品溶液制備方法制成缺三七的陰性溶液。取除積雪草外的其余處方量藥材，按制備工藝方法制備缺積雪草的陰性樣品，按上述供試品溶液制備方法制成缺積雪草的陰性溶液。照薄層色譜法（中國藥典2005年版一部附錄Ⅵ B）試驗，吸取上述供品溶液3～6 μl，對照品溶液各10 μl，陰性溶液各3～6 μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（7∶3∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾［1～5］。
3 含量測定
3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.5%磷酸溶液（20∶80）為流動相；檢測波長為203 nm。理論板數(shù)按人參皂苷Rb1峰計不低于2000。
3.2 對照品溶液的制備 精密稱取人參皂苷Rg1對照品適量，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，即得。
3.3 供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加甲醇20ml，超聲30分鐘（功率250W，頻率40kHz），濾過，容器及濾渣用甲醇10 ml洗滌，洗液與濾液合并，蒸干，殘渣加水15 ml使溶解，用以水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次15 ml，合并正丁醇液，用氨試液25 ml洗滌1次，取正丁醇液，用以正丁醇飽和的水50 ml分2次洗滌，取正丁醇液，分液漏斗用適量正丁醇洗滌，洗液與正丁醇液合并，蒸干，殘渣加甲醇適量使溶解，移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
3.4 陰性溶液的制備 取除三七外的其余處方量藥材，按制備工藝方法制備缺三七的陰性樣品，按上述供試品溶液制備方法制成缺三七的陰性溶液。
3.5 干擾試驗 分別精密吸取對照品溶液、陰性溶液與供試品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，測定，結(jié)果表明，陰性溶液在人參皂苷Rg1保留時間處無吸收。
3.6 線性關(guān)系考察 精密吸取人參皂苷Rg1（C1.13 mg/ml）對照品溶液2、4、6、8、10、12 μl進(jìn)樣，測定其峰面積積分值，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為：Y104623X+19645，r0.9998。結(jié)果表明人參皂苷Rg1在2.26～13.56 μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。
3.7 精密度試驗 精密吸取同一供試品溶液20 μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定其峰面積積分值，計算RSD（%）為0.64%，說明精密度良好。
3.8 穩(wěn)定性試驗 分別精密吸取供試品溶液20 μl，于0、4、8、12、24 h進(jìn)樣，測定其峰面積積分值。計算結(jié)果RSD（%）為0.73%，說明24 h內(nèi)供試液穩(wěn)定性良好。
3.9 重復(fù)性試驗 取同一批號樣品（批號：20080401）按上述條件，測定5次，測定其峰面積積分值。結(jié)果RSD（%）為0.40%，說明方法重復(fù)性好。
3.10 回收率試驗 精密稱取已知含量為11.28 mg/g（批號：20080401）樣品約0.18 g，共6份，分別精密加入人參皂苷Rg1對照品溶液（1.2 mg/ml）1.0 ml，即1.2 mg，按含量測定項下的方法測定含量，計算回收率，平均值為97.22%，RSD為1.42%。結(jié)果見表1。
表1 回收率測定結(jié)果表
3.11 樣品含量測定 取三批樣品，按上述方法測定。結(jié)果見表2。
4 討論
4.1 薄層色譜鑒別 活血促愈膠囊既含有非極性成分，也含有極性性成分，所以先采用甲醇提取、濃縮，濃縮物用水溶解，水層分別用乙酸乙酯和正丁醇萃取出非極性成分與極性成分，然后利用槐米中蘆丁易溶于堿性溶液的性質(zhì)，用氨試液將蘆丁從正丁醇層提取出來。分別制成供試品溶液，以化學(xué)對照品丹參酮ⅡA、蘆丁、人參皂苷Rg1、三七皂苷R1、積雪草苷及羥基積雪草苷對照，用TLC法分別檢出成品中丹參、三七、積雪草、槐米。本法取樣量少，處理方法簡便，經(jīng)濟(jì)，省時，且薄層分離效果好。
表2 樣品含量測定結(jié)果表
4.2 含量測定 三七為方中君藥，主要含三七皂苷類成分，因此筆者擬參照《中國藥典》2005年版一部三七含量測定方法測定三七總皂苷，由于成品中其它成分的干擾，未能達(dá)到要求。人參皂苷Rg1在三七中的含量較高，藥理研究表明,三七Rg1是活血化瘀和促進(jìn)骨拆愈合的有效成分，同時中國藥品生物制品檢定所已提供用于含量測定的對照品，參照《中國藥典》2005年版一部人參葉項下的含量測定方法建立了成品中人參皂苷Rg1的含量方法，經(jīng)方法學(xué)考察和產(chǎn)品測定的結(jié)果表明，所建立的方法簡便，重現(xiàn)性好，能夠作為控制本品內(nèi)在質(zhì)量的指標(biāo)。
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