時間：2023-02-03 08:50:09
開篇：寫作不僅是一種記錄，更是一種創(chuàng)造，它讓我們能夠捕捉那些稍縱即逝的靈感，將它們永久地定格在紙上。下面是小編精心整理的12篇化學成分分析論文，希望這些內容能成為您創(chuàng)作過程中的良師益友，陪伴您不斷探索和進步。
1976年日本人永井正博等在絞股藍中分離得到了人參二醇和2α-羥基人參二醇，首次揭示了絞股藍中含有達瑪烷(dammarane)型皂苷類成分。隨后，人們對絞股藍的化學成分進行了大量的研究，迄今發(fā)現(xiàn)的絞股藍皂苷（Gyp）總共達136種，其中有絞股藍皂苷（Gyp）Ⅲ、Ⅳ、Ⅷ、Ⅻ與人參皂苷（Gin）-Rb1,-Rb3,-Rd和-F2完全相同，此外還分離得到了人參皂苷Rd3，K，其余為人參皂苷的類似物。由于絞股藍的產(chǎn)地不同，其中的皂苷成分和含量也有很大的不同。覃章錚［4］等曾經(jīng)對1990年以前發(fā)現(xiàn)的84種皂苷成分進行過綜述性報道，但由于絞股藍皂苷具有較好的藥理療效，因此，對絞股藍皂苷成分的研究一直是熱點。1990年后，又有52種絞股藍皂苷被相繼報道。根據(jù)苷元結構相近的程度，本文將這52種皂苷分為11類。
第1類絞股藍皂苷結構通式及特點:
序號分子式C-位3β201［5］C47H76O172-ara-glc-rha（S）2［5］C47H76O17
2-ara-glc-rha（R）3［6］C49H78O18MeCO
-glc-rha3｜6｜2xyl-H（S）4［6］C49H78O18MeCO
-glc-rha3｜6｜2xyl-H（R）5［6］C47H76O17-glc-rha3｜2xyl-H
（S）6［6］C47H76O17-glc-rha3｜2xyl-H（R）7［6］C48H78O18-glc-rha3｜2glc-H（S）8［6］C51H80O19MeCO
-glc-rha6｜｜43｜2xylMeCO-H（R）
第2類絞股藍皂苷結構通式及特點：
序號分子式C-位2α3β20（S）9［7］C54H90O23-OH2-glc-glc6-glc-rha10［7］C53H88O23-OH2-glc-glc6-glc-xyl11［8］C54H90O20-Hrha
-glc-rha3｜2｜6rha-H
第3類絞股藍皂苷結構通式及特點：
序號分子式C-位3β1920（S）2112［7］C48H80O192-glc-glc-CH2OH-glc-H13［9］C55H92O22CH3CO-glc-rha｜36｜2xy1-CH3-H-O-glc14［9］C54H92O22-glc-rha3｜2rha-CH3-H-O-glc15［9］C53H90O21-glc-rha3｜2xyl-CH3-H-O-glc16［9］C52H88O21-ara-rha3｜2xyl-CH2OH-H-O-glc17［9］C53H90O22-glc-rha3｜2xyl-CH2OH-H-O-glc18［10］C54H92O222-glc-glc-CH2OH6-glc-rha-H19［10］C54H90O222-glc-glc-CHO6-glc-rha-H20［10］C47H78O172-ara-glc-CHO-glc-H
第4類絞股藍皂苷結構通式及特點：
序號分子式C-位3β232421［11］C41H70O132-xyl-glcH（S）22［11，12］C42H72O142-glc-glcH（S）23［11，12］C41H70O132-xyl-glcH（R）24［11，12］C41H70O142-xyl-glcOH（R）（S）25［13］C41H70O142-glc-xyl-OH（S）（S）
第5類絞股藍皂苷結構通式及特點：
序號分子式C-位3β23（S）26［9］C46H78O18-glc-xyl6｜2xyl-OH27［9］C47H78O19-glc-glc6｜2xyl-OH28［9］C41H70O142-xyl-glc-OH29［9］C41H70O142-glc-xyl-OH30［9］C42H70O142-xyl-xyl-OAc31［9］2-glc-xyl-OAc32［9］C48H80O19-glc-xyl6｜2xyl-OAc
第6類絞股藍皂苷結構通式及特點：
序號分子式C-位3β1933［14］C49H82O18MeCO-glc-xyl2｜6｜3rha-CH334［14］C46H76O17-ara-xyl2｜3rha-CHO
第7類絞股藍皂苷結構通式及特點：
序號分子式C-位3β192135［14］C46H74O17-ara-xyl2｜3rha-CHO-OH36［14］C47H78O17-glc-xyl2｜3rha-CH3-OH37［14］C49H80O18OAc-glc-xyl2｜6｜3rha-CH3-OH38［14］C48H78O17-ara-xyl2｜3rha-CHO-OEt39［14］C49H82O17-glc-xyl2｜3rha-CH3-OEt40［15］C47H78O16-lyx-glc3｜2rha-CH3-OH
第8類絞股藍皂苷結構通式及特點：
序號分子式C-位3β121920（S）21252641［5］C53H90O222-ara-glc-H-CH3-rha-H-OH-glc42［9］C52H86O23-ara-xyl2｜3rha-H-CHO-H-O-glc-OOH-H43［13］C46H76O18-ara-xyl2｜3rha-H-CHO-H-OH-OOH-H44［9］C53H90O242-glc-glc-OH-CH3-xyl-glc-H-OOH-H45［13］C53H90O21-glc-xyl2｜3rha-H-CH3-H-O-xyl-OCH3-H
第9類絞股藍皂苷結構通式及特點：
序號分子式C-位2α3β121920（S）212446［5］C52H88O22-H2-ara-glc-H-CH3-H-O-glc-rha47［9］C52H86O22-H-ara-xyl2｜3rha-H-CHO-H-O-glc-H48［16］C36H62O10-OH-H-OH-CH3-glc-H-H
第10類絞股藍皂苷結構通式及特點：
序號分子式C-位3β1949［14］C49H80O18OAc-glc-xyl2｜6｜3rha-CH350［14］C46H74O17-ara-xyl2｜3rha-CHO
第11類絞股藍皂苷結構通式及特點：
第12類絞股藍皂苷結構通式及特點：
glc=β-D-吡喃葡萄搪基，xyl=β-D-吡喃木糖基，rha=α-L-吡喃鼠李糖基，ara=α-L-吡喃阿拉伯糖基，lyx=β-D-來蘇糖基，Ac代表乙酰基，Me代表甲基，鍵上的數(shù)字代表鍵合的位置
隨著人們對絞股藍皂苷成分研究的不斷深入，新的絞股藍皂苷的不斷發(fā)現(xiàn)，且在結構上有很大的差別。第1類、第4類、第5類、第6類、第7類、第10類和第11類在二十位碳上成環(huán)，但是在其成環(huán)的類型上又存在著很大的差別。第11類所成的環(huán)為含氧的雙環(huán)。第1類、第4類、第6類、第7類和第10類所成的環(huán)為五元環(huán)，而其中的第1類、第4類和第7類為含氧的五元環(huán)，第6類和第10類為不含氧的五元環(huán)，而且即使在含氧的五元環(huán)中氧所在的位置也有所不同。第5類為含氧的六元環(huán)。此外，碳碳雙鍵的有無和位置也有很大的區(qū)別，第4類、第5類、第6類和第11類不含碳碳雙鍵，其他的幾類都含有碳碳雙鍵，第1類、第2類、第3類、第7類和第12類的碳碳雙鍵在24和25位碳上，第8類的碳碳雙鍵在23和24位碳上，第9類和第10類的碳碳雙鍵在25和26位碳上。
2絞股藍多糖的研究現(xiàn)狀
多糖也是絞股藍中含量比較多的化學成分，在研究皂苷的同時，對多糖的研究也逐漸地引起了人們的關注。王昭晶等［18］對堿提絞股藍水溶性多糖進行了研究，并得到一種粗多糖AGM。經(jīng)葡聚糖凝膠(G-100)柱層析檢測其糖分布情況,表明AGM可能由兩種多糖組成,其中一種含有結合蛋白質。而且經(jīng)高效液相色譜確定了AGM的單糖組成為:鼠李糖∶木糖/巖藻糖(其中至少含有木糖或者巖藻糖中的一種)∶阿拉伯糖∶葡萄糖∶半乳=2.43∶1.00∶3.02∶2.59∶3.46。宋淑亮（《絞股藍多糖的分離純化及其藥理活性研究》，2006山東中醫(yī)藥大學碩士論文）對絞股藍多糖進行了較為系統(tǒng)的研究，共分離出了3種絞股藍多糖GPS-2,GPS-3和GPS-4，并對其中的兩種GPS-2，GPS-3進行了深入的研究，確定了GPS-2的分子量為10700Dal，GPS-3的分子量為9100Dal。GPS-2成分中含有鼠李糖和木糖，GPS-3成分中含有鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、半乳糖、果糖和葡萄糖。
3其它化學成分的研究現(xiàn)狀
絞股藍中除了含有皂苷和多糖外，還含有黃酮類化合物、萜類、有機酸、生物堿、多糖、蛋白質等以及鋅、銅、鐵、錳、硒等微量元素，但是，在最近幾年里對這幾方面的研究都比較少，對黃酮化合物的研究也只是對其含量的測定和精制上［19，20］，目前,除了20世紀80年代報道過的商陸素、蘆丁、商陸苷及丙二酸等十多種黃酮類物質外，未見有新的化學成分的報道。
4結束語
研究絞股藍中的化學成分，將有利于進一步明確絞股藍的藥理活性。目前，國內外學者對絞股藍中的化學成分進行了大量的研究,且取得了一定的進展,特別是在絞股藍皂苷的成分研究中，發(fā)現(xiàn)了多種新絞股藍皂苷，這些發(fā)現(xiàn)將有助于進一步對絞股藍的開發(fā)和利用。此外，對絞股藍中多糖的研究也引起了國內一些學者重視，而且也取得了一定的進展，但是近幾年對絞股藍中黃酮化合物成分的研究未見報道。由此可見，對絞股藍多糖和黃酮類化合物成分的研究還有待進一步深入。
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熔點用Kafler顯微熔點測定儀測定，溫度計未校正；紅外光譜用5DXFT型紅外光譜儀測定；核磁共振譜用BRUKERAV500型核磁共振儀測定；層析用硅膠由青島海洋化工廠生產(chǎn)。薄層色譜檢測用254nm、365nm紫外燈、固體碘和顯色劑(質量分數(shù)為10％的硫酸乙醇溶液)。所用試劑均為分析純。藥材于2006年8月采于江西省上栗縣，經(jīng)廣東藥學院藥用植物與中藥鑒定學教研室劉基柱老師鑒定，樣品現(xiàn)保存于廣東藥學院天然藥物化學教研室。
2提取與分離
取半陰干的天胡荽全草7.5kg粉碎，粗粉用95％（體積分數(shù)）乙醇回流提取3次，每次2h，提取液合并，濃縮液用石油醚(60～90℃)萃取，至石油醚層無色。合并萃取液，回收石油醚，得石油醚部位，拌200～300目硅膠上柱，用石油醚、乙酸乙酯不同比例進行梯度洗脫，薄層檢識，相同部分合并，重結晶，純化，得化合物1（90mg）。水層再用三氯甲烷萃取，至三氯甲烷無色，合并萃取液，回收三氯甲烷，得三氯甲烷部位，拌200～300目硅膠上柱，用石油醚、乙酸乙酯不同比例進行梯度洗脫，薄層檢識，相同部分合并，重結晶，純化，得化合物2（10mg）、化合物3（15mg）、化合物4（12mg）。
3結構鑒定
化合物1：白色針狀結晶(石油醚乙酸乙酯)，mp142～143℃。LiebermannBurchard反應（+），與豆甾醇標準品對照共薄層顯示一個斑點，混合熔點不下降，故確定1為豆甾醇（stigmasterol）。
化合物2：白色粉末狀晶體(石油醚乙酸乙酯)，mp301～303℃。不溶于石油醚，微溶于三氯甲烷、冷乙醇、冷甲醇，溶于熱乙醇、熱甲醇和吡啶；Molish反應（+），LiebermannBurchard反應（+）；質量分數(shù)為10%的硫酸乙醇溶液噴霧烘烤均顯紫紅色。與胡蘿卜苷對照品對照，混合熔點不下降，共薄層色譜Rf值相同，故確定2為胡蘿卜苷（daucosterol）。
化合物3：淡黃色針晶(氯仿甲醇)，mp296～298℃，三氯化鐵反應陽性，示有酚羥基存在，鹽酸鎂粉反應陰性，質量分數(shù)為10％的硫酸乙醇溶液噴霧烘烤顯黃色。IR(KBr)ν/cm-1:3412，1652，1615，1570,1310，1042，789。1HNMR(500MHz，DMSOd6)δ：12.94(1H，s，5OH)，10.83(1H，s，7OH)，9.55(1H，s，4′OH)為3個酚羥基質子信號；8.31(1H，s，C2H)為異黃酮C環(huán)2位質子的特征信號；7.38(2H，d，J=6.5Hz)與6.82(2H，d，J=6.5Hz)示有鄰位偶合，為異黃酮B環(huán)2′，6′，3′，5′位質子的特征信號，提示4′OH存在；6.38(1H，d，J=2.5Hz，8H)與6.22(1H，d，J=2.5Hz，6H)為2個互為間位偶合的質子信號及低場12.94(1H，s)的5OH質子特征信號表明A環(huán)為5，7二氧代結構，推測化合物為5，7，4′三羥基異黃酮。上述光譜數(shù)據(jù)與文獻［2，3］對照基本一致，故鑒定化合物3為染料木素(genistein)。
化合物4：白色細針晶(氯仿甲醇)，mp279～280℃，IR(KBr)ν/cm-1:3222,1631,1594,1517,1460。1HNMR(500MHz，DMSOd6)δ：10.78(1H，s，7OH)，9.48(1H，s，4′OH)為2個酚羥基質子信號；8.27(1H，s，C2H)為異黃酮C環(huán)2位質子的特征信號；7.38(2H，d，J=6.5Hz)與6.81(2H，d，J=6.5Hz)示有鄰位偶合，為異黃酮B環(huán)2′，6′，3′，5′位質子的特征信號，提示4′-OH存在；7.96（1H，d，J=7.2Hz，5H），6.93(1H，dd，J=7.2、2.5Hz，6H)與6.85(1H，d，J=2.5Hz，8H)為3個組成AMX偶合系統(tǒng)的質子信號及低場10.78(1H，s)的7OH質子特征信號表明A環(huán)為7氧代結構，推測化合物為7，4′二羥基異黃酮。其光譜數(shù)據(jù)與文獻［4］對照基本一致，故鑒定化合物4為大豆素(daidzein)。
【摘要】目的研究傘形科植物天胡荽(Hydrocotylesibthorpioides)的化學成分。方法用硅膠色譜技術分離化學成分，經(jīng)理化常數(shù)測定、波譜分析等方法進行結構分析。結果得到4個化合物，即豆甾醇(stigmasterol,1）、胡蘿卜苷(daucosterol，2）、染料木素(genistein，3)、大豆素(daidzein，4)。結論化合物2、3、4為首次從該屬植物中分離得到。
【關鍵詞】天胡荽；化學成分；結構鑒定
Abstract:ObjectiveToseparateandidentifythechemicalconstituentsofHydrocotylesibthorpioides.MethodsChemicalsfromHydrocotylesibthorpioideswereseparatedbysilicagelcolumnchromatography,andtheirstructureselucidatedbyIR,NMR.ResultsFourcompoundswereisolatedfromtheweedsofHydrocotylesibthorpioides，whichwereidentifiedasstigmasterol（1）,daucosterol（2）,genistein(3)anddaidzein(4).ConclusionCompounds2，3and4werefirstreportedinHydrocotylesibthorpioides．
Keywords:Hydrocotylesibthorpioides；silicagelcolumnchromatography
天胡荽為傘形科植物天胡荽（HydrocotylesibthorpioidesLam）的全草，別名滿天星、破銅錢、落得打等，分布于江蘇、江西、廣東、廣西、四川等地，資源豐富,天胡荽具有清熱利尿、化痰止咳等功效，民間常用其全草搗爛外敷或外擦治療各種體蘚、股蘚、手蘚、足蘚等各種蘚癥［1］。
目前從該植物中分離得到了木質素類、甾體類、香豆類、黃酮類和齊墩果烷型三萜類化合物等［1］。為進一步深入對該植物進行綜合的研究和開發(fā)利用，本文對天胡荽的半陰干全草化學成分進行了系統(tǒng)研究，共分離得到5個單體化合物，目前確定結構的有4個化合物，分別為豆甾醇（stigmasterol，1）、胡蘿卜苷（daucosterol，2）、染料木素(genistein，3)、大豆素(daidzein，4),其中化合物2、3、4為首次從該屬植物中分離得到。
【參考文獻】
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關鍵詞：蓮；化學成分；藥理作用
0 引言
蓮的根莖、花、葉、果實（蓮子）、蓮蓬等，均具有食用、滋補、醫(yī)藥等多種用途。其中，蓮葉性平味苦，含豐富的維生素C及荷葉堿，具有清暑醒脾、涼血止血之用。蓮子富含維生素C、蛋白質、銅、錳等礦物質及荷葉堿，可清心安神、保健腸胃。蓮藕含有蛋白質、氨基酸、維生素B等成分，可涼血去暑、健胃開脾、活血化瘀。蓮蓬可去除體內濕氣、活血散瘀。蓮心具有清心、降熱除躁、祛火氣的功能。蓮梗可清熱解暑、去濕消腫，并能順暢體內氣血循環(huán)。
1 蓮的化學成分研究
蓮之所以有多方面的藥理作用，主要含有多種類型的活性成分。
1.1 黃酮類化合物
迄今為止， 從蓮的葉、葉脈、花瓣、雄蕊、雌蕊、花托、蓮房、種皮、蓮子、蓮子心、花柄、葉柄和蓮藕等部位均檢測到類黃酮化合物[1]，楊瑞珍、Chen et al和Li et al等人的研究表明在荷花的各組織中類黃酮含量最高的是荷葉， 其次是葉脈、花瓣、雄蕊、雌蕊、花托、蓮房和蓮子心，花柄、葉柄、種皮和蓮藕中含量較低， 蓮子中只能檢測到微量的類黃酮成分[2-4]。
1.2 多酚類物質
多酚有很強的抗自由基防衰老作用。蓮藕、蓮房和蓮子中均含有多酚性物質，鐘怡平通過正交試驗優(yōu)化熱回流提取蓮房多酚，在最佳工藝條件下，提取率高達5.23%[5]。
1.3 生物堿類化合物
研究顯示蓮花、蓮心和蓮葉中含有生物堿，蓮的其他部位鮮有生物堿的報道。
1.4 多糖
據(jù)文獻報道，蓮葉、蓮子和蓮花中均含有大量的多糖類化合物，唐麗君，鐘先鋒的研究顯示多糖在荷葉中的含量可達9%-10%左右，王宇，嚴浪研究了多糖在蓮藕中的含量也高達11%以上，丁利君的研究表明多糖在蓮子中含量也高達9%左右。
1.5 有機酸類
謝瑋等從蓮藕中提取了阿魏酸，阿魏酸相對于干蓮藕的提取率0.127mg/g[6]。早期的研究發(fā)現(xiàn)荷葉中含有酒石酸、蘋果酸、檸檬酸等非揮發(fā)性有機酸。
1.6 揮發(fā)油
張連文[7]和季愛民分別用溶劑提取法和超臨界C02法從蓮心中提取油狀物質并用GC-MS分析，前者鑒定了17種化合物，后者鑒定14種化合物。曾虹燕提取荷葉中揮發(fā)油并對比了超臨界C02法和水蒸汽蒸餾法的優(yōu)劣，發(fā)現(xiàn)用超臨界C02法萃取荷葉揮發(fā)油更具天然性[8]。
1.7 其它成分
林宣賢研究顯示，蓮花中含有17種氨基酸，豐富的Vc、黃酮甙、微量元素鐵等[9]。黃先菊、楊東梅等人的研究發(fā)現(xiàn)蓮心和蓮藕中存在多種無機微量元素[10]。
2 蓮的藥理作用
2.1 降脂降血壓、降血糖
蓮葉含有豐富的黃酮類物質，多人研究發(fā)現(xiàn)，蓮葉提取物具有明顯的降脂作用，其中活性物質主要是蓮葉黃酮，其次是蓮葉生物堿。另外，蓮藕乙醇提取物能顯著的降低小鼠的血糖水平
2.2 抗氧化、抗衰老
研究發(fā)現(xiàn)藕節(jié)提取物總酚含量較高，抗氧化能力較強；蓮子乙醇提取物也表現(xiàn)較強的抗自由基活性。
2.3 抑菌 、抗炎
臨床證明荷葉提取液對牙齦炎、牙周炎、口臭等致病菌有較強抑制作用，該有效成分已被成功的應用于牙膏產(chǎn)品。在堿性環(huán)境下，荷葉中的生物堿對細菌、酵母和霉菌也有較強的抑制作用。
2.4 抗艾滋、抗腫瘤
國外學者從荷葉中提取出來具有抗艾滋作用的生物堿和黃酮。還有研究報道蓮藕中的樺木酸是抗艾滋、抗腫瘤的特效細胞毒素藥。
2.5 鎮(zhèn)定、解熱作用
多人研究發(fā)現(xiàn)蓮藕和蓮藕稈的提取物對小白鼠分別有鎮(zhèn)靜安撫、和解熱作用。
3 結語
蓮以其價格便宜，原料易得，在食療和疾病治療方面發(fā)揮著重要的作用。蓮的種類繁多，各個組織含有的活性成分也不盡相同，因此也具有不同藥理作用，應用之前，應嚴格區(qū)分，以保證藥效和安全。
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論文關鍵詞：蘆根,中藥,現(xiàn)代研究,綜述
蘆根為禾本科植物蘆葦PhragmitescommunisTrin.新鮮或者干燥根莖，為一種常用中藥。據(jù)《本草綱目》記載，蘆根性寒、味甘，入肺、胃經(jīng)，具有清熱瀉火、生津止渴、除煩、止嘔、利尿之功效，常用于熱病煩渴，肺熱咳嗽，肺癰吐痰，胃熱嘔吐，熱淋澀痛。作為中國傳統(tǒng)藥物，蘆根在中醫(yī)臨床治療中有著廣泛的應用。本文就蘆根的化學成分、藥理作用、質量控制研究以及臨床應用等方面進行歸納總結，為蘆根的進一步研究與開發(fā)提供科學的依據(jù)與參考。
1化學成分
蘆根的化學成分較為復雜，其中多糖類成分占的比例較大，此外還含有黃酮類、蒽醌類、酚類、甾體類、小分子酚酸以及揮發(fā)性成分等多種成分。
1.1多糖類
蘆根糖類成分的含量較高，約含51%的多糖，目前關于蘆根多糖的提取研究較多。
蘆根多糖傳統(tǒng)提取方法為醇沉淀法，步驟較為繁瑣：蘆根水煎濃縮60%醇沉過濾粗多糖水溶解10%Ca(OH)過濾酸化抽濾醇沉沉淀物醇洗醚洗
多糖。耿志華對蘆根多糖的提取工藝進行了新的研究，采用了用殼聚糖提取蘆根多糖的方法，實驗證明該方法比傳統(tǒng)的醇沉淀提取法要優(yōu)越。既經(jīng)濟、簡單,又能獲得高收率。這對蘆根多糖的研究將起良好的推動作用。
沈蔚等對微波法提取蘆根多糖進行了研究，通過正交實驗優(yōu)化了提取工藝，結果發(fā)現(xiàn)蘆根微波提取的最佳工藝為料水比1:3，微波火力大火，提取8min。實驗證實微波對蘆根中多糖的提取有輔助作用。
傳統(tǒng)的凝膠色譜法分離純化多糖，不僅材料價高,而且操作煩瑣、穩(wěn)定性較差。蛋殼粉柱分離的新方法也被應用到蘆根多糖的純化當中，研究發(fā)現(xiàn)該方法純化多糖有以下優(yōu)點：①蛋殼粉作吸附劑，不易變質，穩(wěn)定性好、易保存。②蛋殼粉對多糖的吸附可能類似蛋白質與糖的結合,分子間的鍵合力較弱,洗脫比較方便。③蛋殼粉制作方便,價值便宜,具有良好前景。
張國升等采用采用苯酚-硫酸反應，用分光光度計對蘆根多糖進行含量測定。結果發(fā)現(xiàn)樣品中蘆根多糖平均含量可達756.9mg/g。該方法簡便易行，準確，重現(xiàn)性良好，便于實際應用。
1.2甾體類
駱昉通過柱分離得到了β-谷甾醇及胡蘿卜苷兩種化合物。另外，有報道在蘆根提取液中還分離得到了叉蕊皂苷Ⅲ。張國升等利用GC-TOFMS技術鑒定了蘆根中四種甾體的結構，其中有24-甲基膽甾醇、24-乙基膽甾醇、豆甾-1,23-二烯-3-醇、豆甾-1-烯-3-酮。
1.3黃酮類
有報道從蘆根中分離得到了黃酮類化合物小麥黃素。
1.4蒽醌類
已報道的蘆根中分離得到的蒽醌類化合物為大黃素甲醚。
1.5小分子類
目前分離得到的小分子類化合物主要有對羥基苯甲醛、5-羥甲基糠醛、香草醛、阿魏酸、咖啡酸、龍膽酸等。
1.6揮發(fā)性成分
王華采用GC-MS聯(lián)用法對蘆根揮發(fā)性成分進行了分析，結果共檢測出45種成分，其中有糠醛(2.85%)、十六酸(15.7%)、亞油酸甲酯(4.99%)、鄰苯二甲酸二辛酯(16.5%)等。李前榮采用氣相色譜-飛行時間質譜法測定了蘆根中脂肪酸和酯的含量和結構，結果發(fā)現(xiàn)，總粒子流圖測得蘆根提取物中8種脂肪酸和脂肪酯的相對含量為25.7%，通過譜庫檢索確定這八種化合物分別為十六酸、9,12-十八二烯酸、9,12,15-十八三烯酸、13-甲基-十五酸甲酯、十六酸乙酯、11-甲基-十九酸甲酯、13-(3-環(huán)戊烯基)-十三酸甲酯、9,12,15-十八三烯酸甲酯等。
1.7生物堿
研究發(fā)現(xiàn)在蘆根的提取物中存在生物堿類成分核黃素。
1.8其他類
除以上成分外，已報道的蘆根中的化學成分還含有西米杜鵑醇、3α-O-β-D-吡喃葡萄糖基南燭木樹脂酚、薏苡素、硫胺等。
2藥理作用
已發(fā)現(xiàn)的蘆根的藥理作用主要有抗氧化作用和保肝作用兩方面。
2.1抗氧化作用
沈蔚等從清除抑制羥基自由基的產(chǎn)生、還原力和對脂質體抗氧化活性的測定3個方面研究了蘆根多糖的體外抗氧化效果,并同VC進行比較，結果發(fā)現(xiàn)蘆根多糖有一定的抗氧化活性。
2.2保肝作用
已有研究證實,經(jīng)化學分離提取得到有效成分——蘆根多糖有一定的保肝及抗肝纖維化的作用。
張國升等通過研究蘆根多糖對四氯化碳小鼠肝損傷的保護作用發(fā)現(xiàn)，蘆根多糖可增強肝細胞抗損傷能力,降低損傷組肝臟內毒物的含量,提高血清和肝臟GSH-Px活力,進一步將過氧化物氧化成水和無毒醇。研究結果提示由于蘆根多糖具有抗氧化損傷能力。
李立華等通過觀察蘆根多糖對四氯化碳(CCl)致肝纖維化大鼠肝功能及病理形態(tài)學的影響，發(fā)現(xiàn)蘆根多糖大、小劑量均可不同程度保護肝細胞，改善肝功能，降低肝脂肪化程度，抑制肝纖維化。后經(jīng)進一步研究發(fā)現(xiàn)，蘆根多糖大、小劑量均可保護肝細胞并有抗氧化作用,大劑量還可降低膠原含量。提示蘆根多糖可通過抗氧化、保護肝細胞、抑制膠原沉積等途徑來抑制肝纖維化，并通過實驗發(fā)現(xiàn)，作用機制可能與影響TGF-β/Smads信號通路有關。
3臨床應用
蘆根性寒、味甘，具有清熱瀉火、生津止渴、除煩、止嘔、利尿之功效，目前臨床報道可以治療感冒、急慢性支氣管炎、扁桃腺炎、肺膿瘍等癥。另經(jīng)臨床實踐發(fā)現(xiàn)蘆根還可用于治療急慢性肝炎及膽囊炎。
3.1治療感冒
張福生對蘆根沖劑（蘆根、黃柏、夏枯草、魚腥草各60g，白茅根30g）的預防與治療感冒的作用進行了臨床研究，結果發(fā)現(xiàn)蘆根沖劑治療效果好，奏效快，解熱作用強，無副作用。
另有報道采用鮮蘆根（50g）與鮮薄荷葉（10g）代茶飲，可治療傷風咽痛，勝芳等采用此法治療傷風咽痛58例，效果明顯，且無明顯不良反應。
3.2治療急慢性支氣管炎
支氣管炎屬咳嗽范疇，急、慢性支氣管炎病原為各種病毒或細菌，或為混合感染，能引起上呼吸道感染的病原體都可引起，中醫(yī)辨證多屬痰熱戀肺。毛偉松采用蘆根貝母湯加減治療急性支氣管炎，取得較好的治療效果。陳松云等采用蘆根葶茶飲治療慢性支氣管炎35例，總顯效率達85.7%，證明蘆根葶茶飲對慢性支氣管炎有較好的療效。
4.3治療急性扁桃腺炎
楊秀春采用大黃與蘆根配伍，治療急性扁桃腺炎53例，全部治愈。其中38例在服藥后12小時體溫轉正常，15例服藥后1~2天即愈。多數(shù)患者服藥后有一過性大便溏薄，少數(shù)患者伴有腸鳴腹痛，但便后即緩解，其它未發(fā)現(xiàn)不良反應。
3.4治療口臭
口臭多由于熱病傷津,引起舌燥少津造成，而蘆根性味甘寒，有清熱生津的作用，王臻等采用蘆根冰糖煎劑治療口臭患者54例，獲得較好的療效。
3.5治療肺膿瘍
曾立昆嘗試單味干蘆根治療肺膿瘍，效果令人滿意。其用法為：成人每日用干蘆根300克，文火煎2次，取汁約600ml，分3次服完，療程1~3個月。
3.6治療急慢性肝炎及膽囊炎
潘曉華經(jīng)多年臨床實踐發(fā)現(xiàn)，蘆根有清熱利濕，退黃，護肝，降低轉氨酶作用，還能清熱利膽，退黃，消炎，促進膽汁分泌，用于治療急慢性肝炎及膽囊炎效果良好。
4討論
蘆根作為一種臨床常用中藥，對多種疾病有良好的療效，特別在復方治療呼吸系統(tǒng)疾病中，蘆根幾乎是必不可少的藥物之一，說明其有不同于其他中藥的作用，其他藥材無法代替。蘆根中多糖類成分藥理作用研究具有很好的抗氧化及保肝作用，其他成分的研究尚處在初級階段，有效成分不夠明確，因此對蘆根進行系統(tǒng)的化學成分的研究與藥理研究具有非常重要的意義。通過對其化學成分進行系統(tǒng)研究，配合藥理活性的篩選與跟蹤，確定其活性的物質基礎，為蘆根的質量控制研究及復方的進一步研究打下基礎。
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[關鍵詞]大黃；大黃95%乙醇提取物；大黃水提取物；大黃素；標準物質；不確定度
[Abstract]The certified reference materials （CRMs） of emodin in rhubarb and its alcohol extract， water extract were developed by using quantity transfer technology from single chemical composition to the complex systems. The CRM of emodin was used for quantity transfer， and high performance liquid chromatography （HPLC） method was used to determine the contents of emodin in different matrix composition. By establishing mathematical model and calculating the parts of uncertainty， the uncertainty values were finally gotten. CRMs of emodin in rhubarb， alcohol extract and water extract were accomplished. The content values of emodin were 0.40% ±0.03%， 1.15%±0.18%， 0.16%±0.08% （k=2，P=0.95）， respectively. The established method for quantity transfer has successfully solved the technical problems that the value of active ingredient of traditional Chinese medicine can′t be traced to SI units. The series of CRMs are assigned as grade primary reference materials， which are useful for quality control of the emodin content， also provide the accurate and reliable CRM， materials standard and standard methods.
[Key words]rhubarb； alcohol extract； water extract； emodin； CRM； uncertainty
中藥歷史悠久，其用藥特點是多成分復雜體系協(xié)同起效，因此如何進行中藥的質量控制成為研究重點與難點，這也成為了制約中藥國際化與現(xiàn)代化進程的主要原因。在中藥的質量控制中，有效成分含量的控制是關鍵，用于含量測定的中藥對照品的標準化則成為關鍵中的關鍵[1-2]。通常情況下，有效成分在中藥材中的含量較低，通過水煎、醇提等提取方式可以實現(xiàn)有效成分的富集，但有效成分在水提取物和醇提取物中的含量差異顯著。因此對于不同中藥產(chǎn)品的質量控制，若均以有效成分的化學純品進行參照，難免由于含量值數(shù)量級的差異而引起較大測量誤差與基體誤差。
國際對藥品質量控制趨勢已從僅提供藥物的有效成分含量值，發(fā)展到需要提供藥物有效成分的標準值和不確定度值，即將藥品的一般標準提升為計量標準，以保證藥品質量控制的量值溯源性和準確性[3]。因此，能夠符合國際計量標準并能用于國際交流的中藥材相關標準物質將成為中藥質量控制的趨勢所向。
本文首次完成了大黃、大黃95%乙醇提取物、大黃水提取物中大黃素成分分析國家級標準物質的研制，確定了藥材、醇提物、水提物3種不同基質中大黃素成分含量的標準值與不確定度值。大黃不同基質中有效成分含量的系列標準物質研制，使相關中藥藥品檢測更加便捷、準確、可靠，同時也為中藥標準品的標準化探索提供了可借鑒的數(shù)據(jù)與經(jīng)驗。
1材料
高效液相色譜儀：美國Agilent 1200型，DAD檢測器，Agilent chemstation工作站；分析用天平：XS105型，Mettler，感量0.01 mg （0≤m≤5 g，0.01mg；5≤m≤20 g，0.02 mg）；三用電熱恒溫水箱：SHH.W21.420，北京精科華瑞儀器有限公司。
國家一級標準物質：大黃素化學純度標準物質，證書編號GBW09513，純度標準值及不確定度值：99.54%±0.18%（k=2，P=0.95）[5]（經(jīng)中國醫(yī)學科學院藥物研究所研制）。
大黃中藥材，甘肅產(chǎn)（經(jīng)中國醫(yī)學科學院藥物研究所馬林教授鑒定）樣品，質量檢查符合2010年版《中國藥典》規(guī)定要求[6]。大黃中藥材經(jīng)除塵、粉碎、并過50目篩，備用。精密稱取1 g樣品置于棕色安瓿瓶密封包裝，共計完成了500支最小包裝1 g量的大黃中藥材成分分析標準物質候選物樣品的制備工作。
大黃醇提取物，取大黃中藥材，以5倍量95%乙醇作為提取溶劑，經(jīng)加熱回流提取3次，合并提取液，減壓濃縮得浸膏，浸膏真空干燥，粉碎過40目篩，再經(jīng)溫度70 ℃，壓力-0.09 MPa下真空干燥，得大黃95%乙醇提取物，備用。精密稱取100 mg樣品置于棕色安瓿瓶密封包裝，共計完成了500支最小包裝100 mg量的大黃95%乙醇提取物成分分析標準物質候選物樣品的制備工作。
大黃水提取物，取大黃中藥材，粉碎，加入6倍量純凈水，煎煮1 h，過濾，得提取液，將藥渣再加入與提取液等體積的純凈水，煎煮1 h，過濾，再次向藥渣中加入與提取液等體積純凈水，繼續(xù)煎煮1 h，過濾。合并上述3次提取液，水浴揮干后，75 ℃真空干燥，得大黃水提取物，備用。精密稱取100 mg樣品置于棕色安瓿瓶密封包裝，共計完成了500支最小包裝100 mg量的大黃水提取物成分分析標準物質候選物樣品的制備工作。
甲醇（Fisher Chemical，色譜純）；磷酸（分析純，北京化學試劑公司）；娃哈哈飲用純凈水（杭州娃哈哈集團有限公司）。
2方法與結果
2.1高效液相色譜法
2.1.1色譜條件[7-8]Agilent SB C18色譜柱 （4.6 mm×250 mm， 5 μm）；流動相甲醇-0.1%磷酸 80∶20；流速1.0 mL?min-1；柱溫30 ℃；進樣量10 μL；檢測波長254 nm。
2.1.2溶液制備方法標準儲備液制備方法：精密稱取大黃素化學純度標準物質11.08 mg，置于50 mL量瓶中，用色譜級甲醇將樣品完全溶解，并定容至刻度，搖勻，配制成大黃素為220.6 mg?L-1的標準儲備液。精密移取0.1， 0.5， 1.0， 2.5， 5.0， 10.0 mL分別置于10 mL量瓶中，用色譜級甲醇稀釋至刻度，獲大黃素為2.2， 11.0， 22.1， 55.2， 110.3， 220.6 mg?L-1的標準溶液。
精密稱取大黃中大黃素成分分析標準物質樣品150 mg、大黃95%乙醇提取物中大黃素成分分析標準物質樣品30 mg、大黃水提取物中大黃素成分分析標準物質樣品30 mg，分別置具塞錐形瓶中，精密加甲醇25 mL（水提取物為20 mL），稱定質量，加熱回流1 h，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液5 mL（水提取物為10 mL），置燒瓶中，揮去溶劑，加8%鹽酸溶液10 mL，超聲處理2 min，再加三氯甲烷10 mL，加熱回流1 h，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次10 mL，合并三氯甲烷液，減壓回收溶劑至干，殘渣加甲醇使溶解，轉移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻濾過，取續(xù)濾液，即得。
2.2方法學考察
2.2.1線性關系考察分別精密移取6種不同濃度分標準溶液10 μL注入到液相色譜儀，記錄色譜圖及峰面積。色譜峰面積分別55.65， 279.07， 564.76， 1 387.77， 2 768.12， 5 371.02，以峰面積（Y）為縱坐標，進行線性回歸，獲得回歸方程為Y=24.365X+26.858，相關系數(shù)r為0.999 9（n=6）。標準曲線實驗結果表明，大黃素標準溶液在2.2～220.6 mg?L-1線性關系良好。
2.2.2儀器精密度精密吸取濃度為220.6 mg?L-1的大黃素標準儲備液1mL至10 mL量瓶，用色譜甲醇稀釋至刻度。采用高效液相色譜法，按照2.1.1項下色譜條件，重復測定6次，記錄色譜圖，獲得大黃素的峰面積為564.25， 564.87， 566.85， 568.46， 567.96， 567.08，計算RSD為0.30%，表明儀器精密度良好。
2.2.3方法精密度精密吸取濃度為220.6 mg?L-1的大黃素標準儲備液1 mL置于10 mL量瓶，6份，用色譜甲醇稀釋至刻度，采用高效液相色譜法，按照2.1.1項下色譜條件，各重復進樣3次，分別記錄色譜圖，獲得大黃素的色譜面積均值為560.35，557.10，568.95，566.63，564.17，560.70，計算RSD為0.61%，表明實驗方法精密度良好。
2.2.4標準物質溶液制備方法的精密度分別稱取大黃中藥材、大黃95%乙醇提取物、大黃水提取物樣品各6份，按照2.1.2項下的溶液制備方法，按照2.1.1項下色譜條件進行測定。大黃中大黃素成質量分數(shù)為0.391%，0.385%，0.403%，0.397%，0.395%，0.402%，平均為0.395%，RSD為1.7%；大黃95%乙醇提取物中大黃素成分質量分數(shù)為1.133%，1.150%，1.166%，1.154%，1.130%，1.157%，平均為1.148%，RSD為1.2%；大黃水提取物中大黃素成分質量分數(shù)為為0.154%，0.156%，0.159%，0.153%，0.159%，0.159%，平均為0.156%，RSD為1.7%；表明大黃中藥材、大黃95%乙醇提取物、大黃水提取物系列標準物質溶液制備方法的重現(xiàn)性良好。
2.2.5標準物質溶液的回收率試驗分別稱取大黃中藥材150 mg、大黃95%乙醇提取物30 mg、大黃水提取物樣品30 mg各6份，分別加入大黃素純度標準物質作為加標樣品，其中大黃素純度標準物質按化學純度99.54%計。按照2.1.2項下的標準物質溶液制備方法制備樣品，采用高效液相色譜法測定大黃素含量，計算回收率。大黃中大黃素回收率為98.79%，96.61%，99.02%，100.3%，100.1%，102.3%，平均回收率為99.52%，RSD為1.9%；大黃95%乙醇提取物中大黃素回收率為97.66%，99.71%，99.76%，98.77%，98.64%，99.94%，平均回收率為99.08%，RSD為0.89%；大黃水提取物中大黃素成分含量的回收率為97.45%， 98.25%，101.5%，96.86%，98.57%，100.8%，平均回收率為98.90%，RSD為1.9%，結果表明建立的系列標準物質中大黃素成分含量測定方法具有較好的準確性。
2.3均勻性試驗
從500支標準物質候選物中隨機抽取15瓶樣品，每瓶樣品平行取樣3份，均按照2.1.2項下的溶液制備方法，按照2.1.1項下色譜條件測定大黃素成分含量，共分別獲得45個均勻性檢驗數(shù)據(jù)。大黃中藥材、大黃95%乙醇提取物、大黃水提取物的均勻性數(shù)據(jù)，見表1。
采用單因素方差分析（One Way Anova）[9]對均勻性數(shù)據(jù)進行組內和組間的統(tǒng)計分析，計算各自的自由度N1（組間）和N2（組內）。查F分布表中相應N1，N2，α（顯著性水平）所對應的F臨界值，并與計算獲得的統(tǒng)計量F進行比較，若統(tǒng)計量F小于臨界值F，則瓶―瓶之間樣品非均勻引入的離散性與測量方法引入的離散性相比，可以忽略不計，就認為樣品是均勻的。反之就是不均勻的。
測定大黃中藥材、大黃95%乙醇提取物、大黃水提取物中大黃素含量得F分別為1.75，1.14，0.94；均小于臨界值[F0.05（14，30）=2.04]，即，F(xiàn)
2.4長期穩(wěn)定性試驗
對密封包裝后的標準物質候選物樣品放置在常溫條件下長期保存，考察樣品的穩(wěn)定性，并分別于0，1，2，4，6，12月隨機抽樣，每個點隨機抽樣6瓶照2.1.2項下標準物質溶液制備方法，按照2.1.1項下色譜條件測定大黃素成分含量，以X代表時間，以Y代表成分含量值。試驗測定結果見表2。分別擬合2種化學成分的直線，獲得直線方程，計算斜率的不確定度[8-9]，結果分別為：
大黃中大黃素：Y=-0.000 001X + 0.004，S（a）=s∑ni=1（Xi-X）2=2.87×10-6；
大黃95%乙醇提取物中大黃素：Y=0.000 001X+ 0.011 4，S（a）=s∑ni=1（Xi-X）2=1.03×10-5；
大黃水提取物中大黃素：Y=0.000 005X + 0.001 6，S（a）=s∑ni=1（Xi-X）2=6.26×10-6
三者自由度均為：n -2 = 6-2 = 4和P=0.95（95%置信區(qū)間）的t因子等于2.776，由于大黃素含量測定值|a|
2.5成分含量標準值定值
依據(jù)國家一級標準物質技術規(guī)范，本文采用6家實驗室聯(lián)合定值方法對大黃、大黃95%乙醇提取物、大黃水提取物中大黃素成分進行定值，定值數(shù)據(jù)見表3。
采用格拉布斯檢驗，剔除可疑值，并采用科克倫（Cochran）等精度檢驗，證明大黃素成分含量的測量數(shù)據(jù)均屬等精度數(shù)據(jù)。計算獲得6家聯(lián)合定值的中藥材大黃中大黃素成分含量標準值P=0.403%，S=0.000 227；大黃95%乙醇提取物中大黃素成分含量標準值P=1.151%，S=0.000 273；大黃水提取物中大黃素成分含量標準值P=0.159%，S=0.000 08。
2.6不確定度評定
2.6.1成分含量標準值的不確定度評估大黃、大黃95%乙醇提取物、大黃水提取物中大黃素成分分析標準物質的總不確定度由3個部分組成：第一部分是測量標準值引入的不確定度；第二部分是由樣品不均勻性引入的不確定度；第三部分是由樣品穩(wěn)定性引入的不確定度。其中，測量標準值引入的不確定度包含國家一級標準物質引入的不確定度、中藥材及其提取物中有效成分提取及含量測定過程引入的不確定度以及聯(lián)合定值的標準曲線擬合引入的不確定度等方面。
2.6.2標準值的不確定度計算國家一級標準物質引入的不確定度值urelP。大黃素純度標準物質的量值為99.54%±0.18%，其標準不確定度值為0.18%/2 = 0.09%，相對標準不確定度值為urelP=0.09%/99.54%=0.000 904。
測量數(shù)據(jù)的不確定度值urelj。數(shù)學模型考慮到使用標準曲線測量方法、高效液相峰面積值影響因素而建立。大黃、大黃95%乙醇提取物、大黃水提取物中大黃素成分分析標準物質中大黃素成分含量。
x=（A測-b）×Vx1×Vx3a×m2×Vx2×100%
根據(jù)JJF1059-1999 [10]及建立的數(shù)學模型，提取及測定過程引入的不確定度評定結果見表4。
聯(lián)合定值的標準曲線擬合引入的不確定度值urelf。按照指南35 [11]規(guī)定，標準曲線擬合的標準偏差計算公式為。
urelf=uc1/c1， 其中
uc1=SAa1m+1n+c1-c02∑ni=1ci-c02
SA=∑ni=1Ai-aci+b2n-2
S（A） ：標準溶液峰面積的標準偏差；m中藥材大黃、95%乙醇提取物、水提取物溶液的測定次數(shù)；n標準溶液的總測定次數(shù)；C0標準溶液（μg?mL-1）；C1中藥材大黃、95%乙醇提取物、水提取物溶液（mg?L-1）；i校準溶液的第n次測量。以x代表檢測樣品的溶液濃度，以y代表檢測樣品的峰面積，分別擬合標準曲線而獲得直線。聯(lián)合標定單位的標準曲線相對不確定度urel（f）值結果見表5。
按urel=∑ni=1（ureli）2計算獲得6家單位標準曲線的不確定度分別為：大黃中大黃素成分分含量標準曲線的不確定度urel（f）=0.027 4。
大黃95%乙醇提取物中大黃素成分分含量標準曲線的不確定度urel（f）=0.076 4。
大黃水提取物中大黃素成分分含量標準曲線的不確定度urel（f）=0.223 1。
合成標準不確定度計算，按照uc（x）=x×urelP2+urelj2+urelf2分別計算大黃、大黃95%乙醇提取物、大黃水提取物中大黃素成分分析標準物質的合成標準不確定度值為0.000 115，0.000 880，0.000 355。
2.6.3樣品均勻性引入的不確定度urelSH按照國際標準化組織標準物質指南35規(guī)定，由均勻性產(chǎn)生的不確定度計算。
當F=MS組間MS組內大于1時，urelSH=1nMS組間-MS組內；
當F=MS組間MS組內小于1時，urelSH=MS組內n×2v組內。
式中urelSH表示均勻性產(chǎn)生的不確定度，n表示測定次數(shù)，MS組間表示組間均方差，MS組內表示組內均方差。大黃、大黃95%乙醇提取物、大黃水提取物中大黃素成分分析標準物質由均勻性產(chǎn)生的不確定度分別為0.000 040 6，0.000 966，0.000 036 4。
2.6.4樣品穩(wěn)定性引入的不確定度urelSt穩(wěn)定性引入的不確定度計算。
St=t?S（a） ；S（a）=S∑ni=1（Xi-X）2
式中S（a）表示斜率產(chǎn)生的不確定度，S表示直線的標準偏差，Xi表示時間點，X-表示時間均值，St表示穩(wěn)定性產(chǎn)生的不確定度，t表示時間。大黃、大黃95%乙醇提取物、大黃水提取物中大黃素成分分析標準物質由穩(wěn)定性產(chǎn)生的不確定度值分別為0.000 034 4， 0.000 123， 0.000 075 1。
2.6.5總合成標準不確定度按照uc（總）=ucx2+urelSH2+urelSt2計算，大黃、大黃95%乙醇提取物、大黃水提取物中大黃素成分分析標準物質的總合成不確定度分別為0.000 126 7，0.000 894，0.000 365。
2.6.6擴展不確定度由總合成不確定度計算擴展不確定度（U），擴展因子k=2，大黃、大黃95%乙醇提取物、大黃水提取物中大黃素成分分析標準物質的擴展不確定度分別為0.000 254， 0.001 79， 0.000 73。
2.7成分含量標準值及不確定度表示
在測量不確定度的最終計算中，一般采用只進不舍的規(guī)則。故中藥材大黃中，大黃中大黃素成分分析標準物質定值結果：0.40%±0.03%，k=2，P=0.95；大黃95%乙醇提取物中大黃素成分分析標準物質定值結果1.15%±0.18%，k=2，P=0.95；大黃水提取物中大黃素成分分析標準物質定值結果0.16%±0.08%，k=2，P=0.95。
3討論
本論文采用“單一化學成分（有效或標識化學成分）復雜成分體系（中藥材及其提取物）”的量值傳遞技術路線，成功研制了大黃中大黃素成分分析標準物質GBW（E）090308、大黃95%乙醇提取物中大黃素成分分析標準物質GBW（E）090341、大黃水提取物中大黃素成分分析標準物質GBW（E）090328，解決了中藥材及其提取物等復雜體系中的相關化學成分的量值溯源性科學技術難題。
本文研制的大黃及其提取物中大黃素成分分析系列標準物質均含有準確的量值與不確定度，屬國家二級計量有證標準物質，具量值溯源和量值傳遞功能，可用于國際交流，為推動中藥的標準化、現(xiàn)代化與國際化，提供了準確可靠的標準物質、物質標準、標準方法。
中藥材有證國家級標準物質研究在我國剛剛起步，本論文研制的系列標準物質在我國尚屬首次，填補了標準物質領域的品種空白，同時為中藥相同類型標準物質的研制起到了一定的指導和示范作用。
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[關鍵詞]東北刺人參；化學成分；藥理作用；栽培
東北刺人參Oplopanax elatus Nakai，又名刺參，為五加科刺人參屬的一種多年生藥用植物，以根及根莖入藥[1]。東北刺人參生于海拔1 400～1 500 m落葉闊葉林下。自然分布于我國吉林省長白山區(qū)、俄羅斯遠東地區(qū)和朝鮮北部山區(qū)等地，黑龍江省森林植物園也已人工栽培成功[2]。刺人參性溫,味辛、苦,具有補氣,助陽,興奮中樞神經(jīng)等功能,用以治療神經(jīng)衰弱、精神抑郁、低血壓、陽痿、精神分裂癥及糖尿病等,并有類似人參的作用[3]。但近些年來，其野生資源日益減少，加之分布區(qū)域狹窄，生態(tài)幅度小，已處于瀕危狀態(tài)，被列為國家二級保護植物[4] 。
多年來，國內外專家學者對刺人參的化學成分、藥理作用、臨床應用及栽培方法等方面進行了大量研究。為了更好的合理開發(fā)利用刺人參資源，本文對近30年的研究成果進行整理，現(xiàn)綜述如下：
1. 化學成分研究
1.1揮發(fā)油類
李淑子等[5]利用水蒸氣蒸餾法從刺人參的干燥根及根莖中得到揮發(fā)油。經(jīng)過分離、衍生物的制備，并用中性氧化鋁柱層離得到3種成分,即α-蒎烯、β-蒎烯和正-辛醛。
宓鶴鳴等[6]運用氣相色譜-質譜-光譜法,通過不同儀器及分離條件核實、分析鑒定了刺人參揮發(fā)油的30種成分,證明揮發(fā)油中主要組分為單萜烴類、倍半萜類及其含氧衍生物,其中橙花叔醇、榧葉醇、δ-畢澄茄烯、乙酸龍腦子酯和α-十二烯己醛等幾個化合物的含量占總油量的50%以上,為刺人參揮發(fā)油中的主要成分。
李向高等[7]經(jīng)GC-MS-COMP聯(lián)用儀進行氣相色譜分離、質譜鑒定、計算機檢索并與標準圖譜核對,分離得到相似指數(shù)高且與標準圖譜完全相符的化合物16種。采用歸一化法測定揮發(fā)油中各種成分的相對含量,經(jīng)鑒定,其中有7種倍半萜類化合物。在根皮中以β-甜沒藥烯相對含量最高,γ-依蘭烯次之;在全根中以β-金合歡烯含量最高,α-古蕓烯和反式β-金合歡次之。
張宏桂等[8]將刺人參莖用750 mL/L乙醇提取,經(jīng)乙醚萃取后得揮發(fā)物,用GC-MS分離出28種揮發(fā)性成分,查對質譜標準圖譜鑒定了其中10種,并確定了相對含量,分別是甲基環(huán)丙烷( 30.13%)、2-甲基-1-丙烯(1.33%)、3-甲基-2-丁烯醛(0.59%)、3-甲氧基-1,2-丁二烯(0.39%)、1,1-二丁氧基乙烷(2.22%)、(E,E)-2-4-己二烯醛(0.62%)、α-芫荽醇-2-戊醇-4-酮(1.11%)、1-乙基-1,3-二甲基-順-環(huán)己烷(0.32%)、2,2-二甲基-3-丙基環(huán)氧乙烷(0.73%)、4-甲基-4-乙基-2-環(huán)己烯-1-酮(1.39%)。之后,張宏桂等[9]又從野生東北刺人參莖中提得3.1%的揮發(fā)油,經(jīng)氣相色譜和紅外光譜分析,鑒定出32種化合物,其中25種首次從該植物中鑒定出,其主要成分為α蒎烯(6.2%)、辛醛(8.7%)、二甲基-2-2亞甲基原蒎烷(6.1%)和甲基己醛(5.9%)。
胡鑫堯等[10]對東北刺人參的根皮、根莖、莖和葉各部位分別進行了GC-MS和GC-FTIR分析研究,初步認定根皮和根的組分相似；根莖和莖的組分相似；而葉含有的組分最多。各部位共有的化合物包括己醛、β-蒎烯、2-戊基呋喃、正辛醛、β-羅勒烯、α-芘澄茄烯、橙花叔醇、愈創(chuàng)醇、香榧醇和布藜醇等,以橙花叔醇含量最高,可達揮發(fā)油總量的40%左右。
劉昕[11]等采用GC-MS法，從東北刺人參根的揮發(fā)油中分離出15種成分，鑒定了14種化合物。其中有12種化合物為首次從該植物根中分得，其中7，ll-二甲基-3-亞甲基-1，6，10-十二碳三烯和7-甲基-3-亞甲基-l，6-辛二烯為主要成分，二者均為含有亞甲基的多烯化合物。
1.2苷類
許頌[12]等對刺人參原生藥才進行分離提取，得到化合物V、化合物Ⅵ、化合物Ⅶ。經(jīng)過鑒定并與文獻對照，確認化合物V為紫丁香苷(syringin，V)、化合物Ⅵ為豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、化合物Ⅶ為β谷甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。其中化合物Ⅵ、化合物Ⅶ為首次從該植物中分得。
張宏桂[9]等在對野生東北刺人參根、莖化學成分的對比研究中發(fā)現(xiàn)木脂素-β-D-吡喃葡萄糖苷。經(jīng)過進一步的含量測定，該化合物在根中的含量約為莖中的4倍。
王廣樹等[13]利用熱甲醇提取、水與乙醚萃取、硅膠柱層析的方法,從刺人參葉中分離得到2種黃酮甙和1種三萜皂甙,并經(jīng)物理化學常數(shù)及光譜數(shù)據(jù)測定了結構,黃酮甙分別是山奈黃素-3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1-2)-β-D-吡喃葡萄糖甙、槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖基-β-D-吡喃葡萄糖甙,另一種三萜皂甙是3α-羥基羽扇豆-20(29)-烯-23,28-二羧28-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1-4)-β-D-吡喃葡萄糖基(16)-β-D吡喃葡萄糖甙。此后，王廣樹[14]等采用層析分離技術,分得兩種皂苷單體A和單體B。經(jīng)理化常數(shù)和光譜解析確定其結構分別鑒定為常春藤皂苷配基-28-氧-α-L-吡喃鼠李糖基(14)-β-D-吡喃葡萄糖基(16)-β-D吡喃葡萄糖苷(A);3-表白樺脂酸-28-氧-α-L-吡喃鼠李糖基(14)-β-D-吡喃葡萄糖基(16)-β-D-吡喃葡萄糖苷(B)。這兩種皂苷均為首次從刺人參葉中分離得到。1997年，再次分離出3種新皂苷，分別為絲石竹皂甙元3-O-α-β-D吡喃葡萄糖基-28-0-α-L吡喃鼠李糖基(14)-β-D-吡喃葡萄糖基(16)-β-D吡喃葡萄糖苷、3β-羥基羽扇豆-20(29)-烯-23-醛28酸-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷28-O-α-L吡喃鼠李糖基(14)β-D-吡喃葡萄糖基(16)β-D-吡喃葡萄糖苷和3-O-β-D-吡喃葡萄糖基3β羥基齊墩果-9-(11)[15] ,12-二烯-28-酸-28 O-α-L吡喃鼠李糖基(14)-β-D-吡喃葡萄糖基(16)-β-D-吡喃葡萄糖甙.第三種甙又被命名為刺人參苷S[16]。2004年，王廣樹[17]等采用大孔樹脂、硅膠、ODS柱色譜分離純化,經(jīng)理化常數(shù)、光譜學方法鑒定結構.從東北刺人參葉中分離得到了4個新三萜皂苷,其結構分別鑒定為3-O-β-D-吡喃葡糖基3β,23-二羥基羽扇豆-20(29)-烯-28-酸-28-O-α-L-吡喃鼠李糖基(14)-β-D-吡喃葡糖基(16)-β-D-吡喃葡糖苷;3-O-β-D-吡哺葡糖基常春藤皂苷元-28-O-α-L-吡喃鼠李糖基(14)-β-D-吡喃葡糖基(16)-β-D-吡喃葡糖苷;3-O-β-D-吡哺葡糖基3β-羥基齊墩果-9(11),12-二烯-28-酸-28-O-α-L-吡喃鼠李糖基(14)-β-D-吡喃葡糖基(16)-β-D-吡喃葡糖苷;3α-羥基齊墩果-12-烯-23,28-二酸-28-D-α-L-吡喃鼠李糖基(14)-β-D-吡喃葡糖基(16)-β-D-吡喃葡糖苷。
1.3甾體類
李向高等[18]將刺人參中分離的組分II經(jīng)反復硅膠柱層析，用石油醚：乙酸乙酯（9.5:0.5）洗脫，得到結晶II。經(jīng)過鑒定，綜合理化鑒定和光譜解析確認結晶II為β-谷甾醇。
許頌[12]等對刺人參原生藥才進行分離提取，得到化合物Ⅷ。經(jīng)過鑒定并與文獻對照，確認化合物Ⅷ為豆甾醇(stigmasterol，Ⅷ)。
劉金平[19]等將東北刺人參根進行提取分離，得到白色結晶型粉末狀單體III。將數(shù)據(jù)與文獻對照分析，確定該單體為胡蘿卜苷(CHCl3-MeOH)。
1.4蒽醌類
許頌等[20]從刺人參莖、根氯仿萃取中分得4個蒽醌甙元，經(jīng)理化性質和波譜特征分析鑒定為:大黃酚(chrysophanol，I)、大黃素甲醚(physeion，II)、大黃素(emodin，III)和蘆薈大黃素(aloe―emodin，IV)。
武星[21]等對東北刺人參的小分子化合物進行了進一步研究，采用大孔樹脂層析，硅膠層析等方法分離純化得到單體化合物并通過1HNMR、13CNMR、ESI-MS、DEPT、H1-H1COSY等光譜分析，首次確定大黃酸的結構。
1.5 木脂素類
李向高等[18]將刺人參中分離的組分IV經(jīng)反復硅膠柱層析，用石油醚：乙酸乙酯（9：1）洗脫，得到結晶IV。經(jīng)過鑒定，綜合理化鑒定和光譜解析確認結晶IV為芝麻素。
趙月然[22]等，利用硅膠柱色譜、ODS常規(guī)柱、制備液相等手段，通過譜學及化學的方法進行完全的結構分析，并對其信號進行了確定了2個新木脂素類化合物，刺人參苷A，刺人參苷B。其結構為:2，3-二氫-2-(4-O-β-D-吡喃葡萄糖基-3-甲氧基苯基)-3-(4-0-β-D-吡喃葡萄糖基甲基)-5-ω-羥丙基-7-甲氧基-苯并呋喃；(-)erythro-3-methoxy-4-O-β-D-glueopyranosyl-phenyl propane-7，8，9-triol或(-)erthro-guaiacyl glycerol 4-O-β-D-glucopyranoside。
1.6其他成分
1.6.1脂肪酸 張宏桂等[23]用GC-MS分離出35種成分，計算機檢索，核對質譜標準譜圖鑒定了其中18種脂肪酸，其中主要成分6，9-十八碳二烯酸(34.20%)，其它不飽和脂肪酸有油酸、棕櫚油酸等。
劉金平等[24],東北刺人參根、莖的總離子圖分別給出29個峰和35個峰，質譜圖經(jīng)計算機庫存信號檢索及文獻資料核對，分別從根和莖中鑒定出14種和18種脂肪酸。采用數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)對給出的色譜峰面積進行歸一化處理，計算出各種成分的相對百分含量。根部脂肪酸主要成分為異油酸(28.8%)、壬二酸(16.4%)和3-羥基十六酸(6.2%)；莖部脂肪酸主要成分為6，9-十八碳二烯酸(34.2%)和棕櫚油酸（5.4%）。
許頌[12]等對刺人參原生藥才進行分離提取，得到化合物X、化合物XI。經(jīng)過鑒定并與文獻對照，確認化合物X為二十二烷酸（behenieaeid，X）、化合物XI(tetraeosanoieacid，XI)。
1.6.2 脂肪醇 劉金平[19]等將東北刺人參根進行提取分離，得到白色粉末狀單體I。將數(shù)據(jù)與文獻對照分析，確定該單體為正二十七烷醇。
1.6.3微量元素 劉建國[25]等用原子吸收分光光度法對東北刺人參和人參的Cu、Fe、Zn、Mn、Cr、Sr、Ag和Al元素進行測定和對比研究時發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)e、Zn和Mn是刺人參和人參的主要微量元素成分，且刺人參Mn元素的含量比人參高許多。
2.藥理作用研究
2.1 對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用
曲淑巖[26]等給小鼠腹腔注射刺人參油乳劑0．67 ml/kg時，可見動物安靜、馴服、自主活動減少；劑量為2．76 ml/kg時，動物伏臥、眼瞼下垂，保持對外界傳入刺激的反應性，能回避有害刺激。刺人參油乳劑對戊巴比妥鈉、水合氯醛和氯丙嗪、眠爾通有協(xié)同作用，對戊四唑引起的驚厥或電驚厥有拮抗作用。
2.2 抗炎作用
刺人參揮發(fā)油或乳劑對角叉菜膠引起的正常大鼠和切除腎上腺的大鼠足腫脹均有抑制作用；對組胺或PGE2引起的大鼠足腫脹也有抑制作用，能降低炎癥組織滲出液中組胺或PGE2的含量；并能對抗組胺或PGE2 引起的毛細血管通透性的增加；對白細胞游走及大鼠棉球肉芽腫均有抑制作用[27]。
2.3 抗菌作用
付愛華[28]等經(jīng)實驗研究證明,刺人參揮發(fā)油在0.0625%~0.25%低濃度即可對多種皮膚癬菌有顯著的抑菌和殺菌作用。用1%刺人參揮發(fā)油配制的霜劑對皮膚無刺激性,治療淺部真菌病有效率為90%。
宓鶴鳴[6]等通過實驗研究證實，刺人參揮發(fā)油含量在0．062 5％時即可對石膏樣小孢子菌、羊毛狀小孢子菌、石膏樣發(fā)癬菌、紅色發(fā)癬菌及絮狀表皮癬菌有明顯的抑殺作用.
張宏桂[9]等采用體外抗菌實驗證實，野生東北刺人參莖揮發(fā)油對紅色毛癬菌等7種皮膚癬菌抗菌活性MIC為0.063%~0.125%，MFC為0.125%~0.25%，并且從野生東北刺人參莖揮發(fā)油分離得到已知的抗菌有效成分里哪醇（2.4%）和對-聚傘花素（1.8%）。
2.4 對血壓的影響
陳霞[29]等通過實驗結果表明，刺人參皂苷10mg/kg)靜脈注射可使MAP下降，而增加劑量(30、100mg/kg)可引起MAP升高，其結果與人參莖葉皂苷的作用相似。
2.5 抗衰老作用
傅穎新[30]、宓鶴鳴[31]均通過D-半乳糖球后注射對小鼠造成亞急性衰老病理模型對刺人參的抗衰老作用進行了研究。各項檢測結果表明，刺人參確有延緩衰老的作用。其中以皮膚羚脯氨酸含量的增加、心肌脂褐質含量下降尤為顯著，刺人參組與人參陽性對照組比較，兩組呈現(xiàn)一致的抗衰老作用。在降血糖、清除心肌脂褐質以及小鼠游泳時間增加率、耐缺氧時間、耐低溫能力等方面刺人參比人參的作用還略強一點。
2.6 解熱鎮(zhèn)痛作用
曲淑巖[26]等采用醋酸扭體抑制法觀察小鼠對化學引起的疼痛反應，結果顯示刺人參油乳劑對化學性引起的疼痛有鎮(zhèn)痛作用。曲淑巖[26]等亦報道了刺人參揮發(fā)油的油乳劑對sc啤酒酵母引起的人工發(fā)熱有明顯的解熱作用，并具有降低大鼠正常體溫的作用。
2.7 抗輻射
刺人參乙醇和乙醚提取物，在離體條件下有抗輻射的作用[32]。
2.8 對垂體、腎上腺皮質功能的作用
給大白鼠po本品莖的40%醇浸出物10g/kg可使大白鼠兩側腎上腺內維生素C的含量明顯降低,當垂體切除后本品的上述作用則消失,表明本品興奮腎上腺皮質功能是通過垂體或垂體以上部位進行的,預先注射戊巴比妥鈉不能阻止刺人參上述興奮作用,但能被預先注射氯丙嗪加戊巴比妥鈉所滯[32]。
3 人工栽培研究
3.1無性繁殖
刺人參無性繁殖是可行的,但離開其適生的自然生態(tài)環(huán)境不易成活。刺人參是淺根性樹種,無性繁殖時根莖不宜埋得太深,最深不能超過3 cm,在濕潤土壤上2 cm即可;無性繁殖的最佳根、莖段是老齡段[33]。
刺人參切干移栽成活率較高。移栽一般不受苗齡影響,埋干、扦插都能成活。激素對扦插成活有一定的促進作用,以頂枝扦插成活率較高。刺人參無性繁殖中有假死現(xiàn)象,經(jīng)一段時間后能恢復生機,平茬和壓蔓也可繁殖[34]。
3.2 有性繁殖
采取有性繁殖方法擴大東北刺人參種群數(shù)量,是目前所有繁殖方法中最為科學有效的,它可以避免其它繁殖方法破壞現(xiàn)有資源的不足。雖然東北刺人參可以通過有性途徑進行繁殖,但由于對其種子成熟、休眠和萌發(fā)的機理了解太少、太不透徹,目前種子發(fā)芽率還很低,而且幼苗對化學藥劑敏感,所以有性繁殖還尚不能成為有效的擴繁手段[35]。
4 展望
通過查閱文獻不難發(fā)現(xiàn)，對東北刺人參的化學成分和藥理作用的研究相對較多，但是對臨床應用的研究還是不夠，應該加強東北刺人參在臨床應用方面的研究。
由于刺人參揮發(fā)油中有4種成分與已報的人參揮發(fā)油中所含成分相同[36-38],刺人參實驗組與人參對照組在抗衰老作用方面呈現(xiàn)一致的抗衰老活性,而且紅細胞數(shù),胸腺重量,腦脂褐素量,皮膚中羥脯氨酸量,血糖,血脂等指標,刺人參的作用較人參強[31], 這對刺人參作為具有抗衰老作用的新藥的研制和開發(fā)具有積極的指導意義。
刺人參揮發(fā)油霜劑具有良好的抗真菌活性，且具有純天然、無毒副作用、生產(chǎn)成本低、治療有效率高的特點，對多處癬菌有顯著的殺菌和抑菌作用，適宜作為抗皮膚癬菌的新藥進一步研制。
此外，刺人參油表現(xiàn)出對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的抑制作用，但其產(chǎn)生這一作用的有效成分及作用機理尚不清楚，有待進一步研究。
東北刺人參是我國長白山的道地藥材，目前已栽培成功。合理開發(fā)和利用這一資源，對發(fā)展東北的中藥經(jīng)濟具有前瞻性的意義。
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1.黃檗的藥用及其他利用價值
1.1 黃檗的生物學特征：黃檗(Phellodendron amurense Rupr.)為落葉喬木，樹高10-20m，最高可達30m，胸徑1m。主要生長于我國東北地區(qū)，河北、內蒙古、山西亦有少量分布。黃檗根系發(fā)達，萌發(fā)能力強，適合生長在土層深厚、濕潤、通氣良好、富含腐殖質的中性或微酸性土壤中［1］。
作為我國東北闊葉紅松林的重要伴生樹種，黃檗是“三大硬闊”之一。黃檗樹皮淡灰褐色，內層皮薄呈鮮黃色，髓心黃色；黃檗為雌雄異株，花單性，聚傘狀圓錐花序，5基數(shù)，黃綠色，雄花退化雄蕊呈鱗片狀；漿果狀核果近球形，直徑lcm，初長為綠色，成熟時藍黑色，有特殊香氣食之味苦。15-20年生黃檗開始結實，即使豐年種子的間隔期亦達2-3年［2］。
目前種子繁殖是黃檗主要的育苗方式，分春季和秋季兩個播種時期。春季播種的種子需低溫處理，大多采用雪藏或層積處理，未處理過的種子萌發(fā)率不足處理過的一半。也有人研究過扦插和嫁接技術，不過尚停留在實驗室培育階段，未進行大規(guī)模生產(chǎn)［3］。
1.2 黃檗的化學成分：日本學者村山義溫等于1926年從日本產(chǎn)黃檗中得到小檗堿(berberine)及少量巴馬亭(palmatine)，此后各國學者相繼報道了其它化學成分［4］，其中小檗堿最為重要。
小檗堿又稱黃連素，它是一種異喹啉類季銨型生物堿，分子式為［C20H18NO4］+，大多時以鹽酸小檗堿形式存在于小檗科等4科10屬的多種植物中［1］。小檗堿存在季銨型、醛型和醇型三種不同形式，其中以季銨型最為穩(wěn)定［5］。
在黃檗樹皮中分離出：小檗堿(berberine)、掌葉防己堿（palmatine）、藥根堿（jatrorrhizine）、木蘭花堿（thalictrine）、黃柏堿（phellodendrine）、蝙蝠葛任堿（menisperine）7種生物堿；黃柏內酯（citrolimonin）、黃柏酮（obacunoic acid）、kihadanin A，kihadanin B，諾米林(nomilin）5種檸檬苦素類化合物；及3種甾醇和12種酚類衍生物合計27種化學成分。在黃檗根皮中分離出小檗堿、藥根堿、黃柏堿，同時發(fā)現(xiàn)在黃檗莖皮中也含有有微量小檗堿、藥根堿和黃柏堿存在。在黃檗果實中分離出少量小檗堿、巴馬亭；另含揮發(fā)油約2.16%，已鑒定出23種化合物，主要成分為月桂烯、香茅醇，α-蒎烯等；此外還得到少量檸檬苦素類及原檸檬苦素類化合物［6］。黃檗葉中含10%的黃酮類化合物、少量生物堿以及多糖［7］。
1.3 黃檗的藥用價值［8］：黃檗其皮去木栓層后可入藥，謂之“黃柏”。《本草綱目》上說，黃柏有清熱燥濕，瀉火除蒸，解毒療瘡的功效，用于治療濕熱瀉痢、濕疹瘙癢、骨蒸勞熱、瘡瘍腫毒，以及黃疸、帶下、熱淋、腳氣、痿辟、盜汗、遺精等。
1.3.1 抗菌作用。黃檗抗菌有效成分為小檗堿。體外試驗對金黃色葡萄球菌、草綠色鏈球菌、溶血性鏈球菌、肺炎雙球菌、白喉桿菌、痢疾桿菌、腦膜炎雙球菌、霍亂弧菌、炭疽桿菌均有較強的抑制作用；對破傷風桿菌、枯草桿菌、百日咳桿菌等芽孢菌亦有抑制作用；對鳥型結核桿菌雖無直接抑制作用，但可使菌數(shù)減少。采用黃柏治療結核病人，其臨床癥狀及X線檢查均有好轉，且效果優(yōu)于黃連。據(jù)報道，使用黃柏酸堿法提取物制成1：1黃柏液，以灌腸法治療菌痢，一般2-4d可痊愈。用直流電導入黃柏理療液治療慢性前列腺炎，總有效率達97.3%。
關黃柏和川黃柏的乙醚浸提物對紅色發(fā)癬菌和新型隱球菌具有較強的抑制作用，效果比制霉菌素好，但對白色念珠菌的抑制作用較弱。
1.3.2 降壓作用。對動物注射黃柏提取液，可產(chǎn)生顯著而持久的降壓作用。對季銨型的黃柏堿合成的昔羅匹林降壓迅速、效果顯著，此外，昔羅匹林還有較強的抗腎上腺素樣作用，對窒息、壓迫頸動脈、電刺激大內臟神經(jīng)引起的升壓反應及由注射腎上腺素或電刺激頸上交感神經(jīng)節(jié)導致的肌膜收縮反應均有較好的抑制作用。
1.3.3 抗滴蟲作用。用10%的黃柏煎劑與滴蟲培養(yǎng)液1：1混和，能抑制陰道毛滴蟲的增殖。
1.3.4 抗肝炎作用。黃柏堿對慢性肝炎有一定療效，6.25-100%的黃柏煎劑體外試驗，對HBV有抑制作用。
1.3.5 抗?jié)冏饔谩｜S柏提取物（去小檗堿）100、1000mg/kg灌胃或皮內注射，對乙醇、阿斯匹林或幽門結扎引發(fā)的大鼠胃潰瘍有抑制作用。
1.3.6 其它作用。黃柏堿及昔羅匹林對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有抑制作用。注射昔羅匹林后小鼠的自發(fā)活動、各種反射均受到抑制；而家兔的腦電波出現(xiàn)振幅慢波，且黃柏堿有輕度的箭毒樣作用，能抑制由乙酰膽堿引起的收縮反應。此外，黃柏粉可使離體兔腸振幅增強，其中黃柏酮可增強其張力及振幅；而黃柏內酯則能抑制腸管振幅。此外，黃柏還有促進胰腺分泌、保護血小板、健胃、利尿、外用促進皮下溢血吸收等作用。
1.4 黃檗的其他應用：川黃檗除了有較高的藥用價值，也是具有觀賞價值的園林樹種。川黃檗主產(chǎn)于四川，云南，湖北等地，其樹形高大，樹冠寬闊，枝葉開展。川黃檗夏季枝繁葉茂，濃蔭覆蓋，聚傘狀的淡黃色圓錐形花序生于枝頂，花香清淡怡人；秋季樹葉變黃，在自然風景區(qū)中與紅松、落葉松、花曲柳等混交，形成豐富的景觀層次。川黃檗生長較快，且耐陰，耐寒，適應性很強，在貧瘠和干燥的條件下都能生長。在四川海拔350~1900m的范圍內都有栽培［9］。此外，果實所含有的異丁基酰胺類化合物有較強的殺滅家蠅與殺菌作用。川黃檗也是對以SO2、鉛為主復合物染污的抗性樹種［10］，很適于作為園林樹種推廣應用。
2.黃檗資源現(xiàn)狀及可持續(xù)利用對策
作為具有很高藥用價值經(jīng)濟價值的黃檗，其資源卻是十分緊缺的。采得的黃柏基本用來提取小檗堿，黃柏的制取大多是采用環(huán)剝法，于立夏至夏至期間采收栽植10年以上的樹皮，趁鮮刮去粗皮，曬干而得。每株樹經(jīng)過剝皮后需休養(yǎng)4-5年才能再次剝取，一次剝去的干樹皮約15~20Kg。2010年黃柏的產(chǎn)量為6000t，由于價格壓低的緣故實際產(chǎn)量只有3000t，但是市場需求量卻達到12000t，這必然加大供給求關系帶來的矛盾。在利益的驅使下，黃檗資源遭到了極為嚴重的破壞，野生黃檗資源日漸稀少；與此同時黃檗的栽培仍處于較低水平。黃檗主要繁殖方式為種子繁殖，即使豐年結種也需要間隔3年左右，且扦插技術還處于研究階段，至使未能大面積生產(chǎn)。另外由于地區(qū)差異、栽培品種以及采收時節(jié)的不同，制得的黃柏有效成分含量常存在有較大差異，質量難以控制，這就加劇了人們對野生黃檗資源的掠取。1984年，野生黃檗已被列入國家二級瀕危保護物種，嚴禁破壞。在滿足市場需求又保護野生資源的同時，合理的開發(fā)利用、科學的人工培育以及尋找其他替代途徑成為解決該矛盾的主要對策，并使黃檗資源得到可持續(xù)發(fā)展。
做到資源可持續(xù)發(fā)展，可以從下面幾個方面入手：①加強對黃檗野生資源的重視程度，實施就地保護：在野生黃檗的分布集中的區(qū)域內，可以建立各種類型的自然保護區(qū)、森林公園或風景名勝區(qū)，從而實現(xiàn)野生黃檗的就地保護。②加強生物學方面的研究和利用：結合黃檗的生態(tài)學特性，從物種進化的角度深入分析黃檗的生態(tài)狀況和瀕危程度，以解決黃檗資源瀕危的內在機制問題［11］。③大力發(fā)展黃檗人工種植：1998年的調查結果顯示全國黃柏天然林面積不足五千畝，人工林為零，可見發(fā)展黃檗人工培植有廣闊的空間。人工種植需要科技的指導，例如雪藏技術、扦插技術都可以大大提高黃檗造林的成活率，這是使黃檗資源做到可持續(xù)發(fā)展的主要途徑。④尋找藥源替代途徑：中藥黃連中含有與黃檗相近的某些成分，而黃連又較易種植，可以在一定程度上替代黃檗；而研究表明對從黃檗中分離得到的內生真菌進行發(fā)酵，其代謝產(chǎn)物含有黃柏藥效成分小檗堿。因此，將植物內生真菌與基因工程技術、發(fā)酵工程技術相結合，對于獲得藥用成分的新途徑和內生真菌的理論研究都將有重大突破。
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[論文摘要]電站鍋爐在運行過程中，由于多種因素的影響會導致各種各樣缺陷的產(chǎn)生，既有有關承壓部件的，也有有關水汽質量的，針對汽包焊縫裂紋典型案例做好深入地分析，將有利于雷同缺陷及時、妥善處理。
在役電站鍋爐實際檢驗過程中，經(jīng)常會遇到各種各樣的實際檢驗問題，但歸結起來主要有幾類比較典型的情況。下面選取定期檢驗過程中發(fā)現(xiàn)及處理過的汽包焊縫裂紋案例，深入探討了典型承壓部件損壞的部位、損壞的原因、修理的具體方案等，對這類典型問題的深入研究，有助于雷同問題的及時、快速、正確處理，確保被檢鍋爐按期、安全的投入運行。
某廠電站鍋爐汽包在停爐內部檢驗中發(fā)現(xiàn)了嚴重的焊縫裂紋缺陷，采取措施進行修復后，保證了汽包的安全運行，現(xiàn)將這一技術措施剖析如下：
一、汽包缺陷檢查
該廠鍋爐系1997年制造、安裝，1998年投入使用，2007年8月停爐檢驗時，經(jīng)磁粉和超聲檢測發(fā)現(xiàn)，汽包第2道環(huán)焊縫上部外側坡口熱影響區(qū)有一條明顯的腐蝕氧化裂紋，裂紋長450mm、寬0.02mm，最深處達20-25dB，最淺處3dB，在第2條環(huán)焊縫上部內側存在熔合線表面裂紋缺陷6處；其它焊縫也存在多處表面和埋藏缺陷，但未超標。分析表明：從開裂的第2條環(huán)焊縫，焊縫外觀很不規(guī)則，焊縫比母材高出許多，形成了一個突變的臺階，在焊縫的融合線附近存在較多表面缺陷;這樣，在鍋爐頻繁的啟停中，汽包受到周期性的加熱、冷卻，在交變應力的作用下導致開裂，繼而發(fā)展。鑒于上述情況，采用了兩種方案：（1）對于未超標的埋藏缺陷作重點記錄，以便日后檢驗中作重點檢查；如發(fā)現(xiàn)缺陷發(fā)展、開裂，立即處理。（2）對開裂的缺陷，制定補焊工藝措施，對裂紋進行挖補修復。
二、缺陷挖補前的各項工作檢查
（1）汽包母材化學成分（%）:C-0.20，Si-0.46，Mn-1.15，P-0.008，S-0.0180
（2）汽包焊縫化學成分（%）:C-0.66，Si-0.60，Mn-1.50，P-0.022，S-0.0130，化學成分分析結果符合J507焊條成分要求。
（3）金相檢查：焊縫：鐵素體+珠光體，珠光體呈帶狀分布，帶狀組織2-3級，晶粒度6級。熔合線：鐵素體+珠光體，珠光體呈網(wǎng)狀分布，熔合線兩側有脫碳。熱影響區(qū)：鐵素體+珠光體，組織欠均勻，晶粒度5-6級。母材：鐵素體+珠光體，組織尚均勻，晶粒度6～7級。以上所檢查的組織皆屬正常。
（4）硬度測試：母材：HB125。熱影響區(qū)：HB115。焊縫區(qū)：HB125。以上所測的硬度值均符合要求。計算結果證明，19Mn5鋼無再熱裂紋傾向。
（5）19Mn5鋼產(chǎn)生冷裂紋傾向和焊接熱影響區(qū)淬硬傾向計算表明，汽包材料基本無冷裂傾向。
三、缺陷挖除
（一）開槽挖除工作所用的設備和材料
500A直流電焊機1臺；0.75m3空壓機1臺；碳棒直徑6mm、8mm，100根。
（二）缺陷開槽挖除方法及技術要求
①由于19Mn5鋼的塑性較好，開槽挖除裂紋前不必鉆孔止裂。②開槽方法：電弧氣刨后，砂輪磨光。③為了減少電弧氣刨的激熱影響，應將溫度預熱到200℃以上再進行開槽，在挖掉缺陷的同時，應盡可能使槽開得規(guī)整、光滑，并盡量減少開槽的體積。
四、缺陷挖除后的補焊工藝
（一）焊條材料選擇低氫型J507焊條。打底用中Φ3.2mm的焊條，其余用Φ4mm的焊條。
（二）施焊工藝：焊條在350℃烘烤2小時，烘烤的焊條放入保溫箱內，隨時使用。補焊過程中，始終保持預熱溫度，最低溫度150℃，施焊中采取多層多道焊。先沿U形坡口焊三層，使坡口寬度變窄，以減少收縮變形引起的應力，然后由下至上多層多道焊。每道焊縫用分段焊法，分段時填空焊的焊接方向應與原分段焊的方向相反。各焊道分段應錯開，可減少焊接應力的過大累積。打底焊采用中3.2mm焊條，焊道寬度控制在6-8mm左右，熔深控制在2-3mm之內。為減少收弧次數(shù)，每根焊條一次焊完。焊完一道，必須清渣進行檢查，確認無缺陷時繼續(xù)施焊。
五、焊后熱處理
焊后熱處理采用局部整段內加熱法，使用框架式電阻加熱器，總容量108kvA，9路輸出，每路12kVA，輸入電壓220V，自動控溫表2塊，溫度記錄儀1臺，熱電偶17支，使用HM1300×355×88mm框架型加熱塊6塊，平穩(wěn)地置于汽包上半周，加熱塊與電源連接引出線用Φ10mm圓鋼，套上Φ12mm的瓷管，然后與鑲套銅電纜連接，銅電纜接到控溫設備上。為了減少熱量損失，在加熱帶的兩端設計兩塊堵板，堵板用3mm厚的鋼板制成Φ1600mm的圓板，將圓板分割4塊在汽包內組裝;在圓板每300mm×400mm的面積上焊中6×170mm的鋼絲若干根，以固定保溫材料；保溫材料選用硅酸鋁耐熱材料。電源連接線和熱電偶連接均從圓板的孔通過。
六、熱處理后的各項工作檢查
（一）表面檢測：對補焊區(qū)內、外壁做磁粉檢測，未發(fā)現(xiàn)任何缺陷。
（二）超聲波檢驗：用超聲波對內外壁進行檢驗未發(fā)現(xiàn)超標和可記錄缺陷。
（三）金相檢驗：焊縫、熔合線、熱影響區(qū)、母材等金相組織屬正常范圍之內。
（四）硬度檢驗：焊縫HB130，熱影響區(qū)HB120，母材HB120。
（五）熱位移、撓度、橢圓度測量：熱處理升溫到600℃，甲側向西位移5mm，乙側向東位移7mm；熱處理完，汽包溫度降到室溫，甲乙側位移恢復到補焊前。撓度：熱處理后，甲側0，中部0.02，乙側0.02，正常。橢圓度a：原始值=0.22%；焊后值=0.25%；熱處理后值=0.25%。補焊后橢圓度變化不大，在允許值范圍內。
（六）殘余應力測試：通過實測熔合線處殘余應力為190MPa，偏離焊縫的近縫區(qū)應力為170MPa，焊縫平均最大應力為180MPa其殘余應力水平與原始態(tài)相符，說明補焊工藝、熱處理工藝、補焊質量都符合要求。
七、裂紋修復后的結論分析
汽包裂紋挖補修復后，各項技術指標均符合規(guī)定要求：
（1）補焊焊縫質量達到JBI152-81標準的I級焊縫要求。
（2）硬度最高為HB130，遠遠小于線材硬度+100的規(guī)定，殘余應力最大為190MPa，大大小于245MPa規(guī)定，金相組織也沒有變化，由所有這些檢查結果推知，補焊焊縫具有良好的綜合機械性能，沒有產(chǎn)生任何永久變形。
（3）該汽包裂紋挖補修復后運行至今已近一年，在今年5月停爐檢修時再次對裂紋剔除的補焊部位進行了磁粉和超聲檢測，同時對有記錄缺陷部位進行了跟蹤檢查，均未有異常情況出現(xiàn)。由此可以說明，針對此次汽包檢查出來的缺陷所采取的處理方案不僅符合標準，而且修復具體措施的實施是成功的。
參考文獻
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【摘要】 目的對丹參藥材的種源分布及道地性進行考察研究。方法通過對安國中藥材市場調研和文獻查閱，探討目前丹參藥材的種源及分布概況。結果丹參商品藥材除正品外，尚有多種代用品流通使用，同時也有部分偽品干擾市場。結論丹參種源復雜，商品的來源及質量標準有待進一步研究確定。
【關鍵詞】 丹參； 正品； 偽品； 種源分布
丹參是重要傳統(tǒng)中藥之一，具有活血化淤、通經(jīng)止痛、抗菌消炎的功效，對心腦血管、血液系統(tǒng)疾病及感染有顯著療效。歷版藥典收載丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根莖為中藥丹參唯一來源，但在民間應用和地方入藥中，同屬多種植物的根均作丹參用，據(jù)報道藥用植物達25種（含變種、變型）。商品調查發(fā)現(xiàn)，丹參藥材來源植物約10種（含變種、變型），有丹參、甘西鼠尾、滇丹參、南丹參、三葉丹參及其變種或變型等。其中丹參和甘西鼠尾為主流品種，在全國流通，其余則為地方用藥［1］。
丹參主要成分有脂溶性和水溶性兩類，其中脂溶性成分主要有二氫丹參酮Ⅰ(1，2Dihydrotanshinone Ⅰ)、隱丹參酮（Cryptotanshinone）、丹參酮Ⅰ（Tanshinone Ⅰ）、丹參酮ⅡA(Tanshinone ⅡA)，具有抗菌消炎的作用；水溶性成分主要為酚酸類，有丹參酚（salviol）、丹參酸甲、乙、丙（salvianicA，B，C）、丹參酚酸A（salvianolic acid A）、原兒茶醛（protocatechuical dehyde）、原兒茶酸（protocatechuic acid），丹參素（3，4二羥苯基乳酸）、熊果酸（ursolicacid）、異阿魏酸（isoferalic acid）等，具有活血化淤的作用，對組織細胞再生有調節(jié)作用，可用于肝、肺等組織纖維化、皮膚創(chuàng)傷、疤痕、術后粘連、消化道黏膜潰瘍等方面的治療。2005年版《中國藥典》含量測定項下制規(guī)定丹參酮ⅡA不得少于0.20%，將其作為藥材質量鑒定的法定標準之一。
1 丹參正品類
1.1 丹參Salvia miltiorrhiza Bge.為唇形科鼠尾草屬植物，分野生丹參和家種兩種商品規(guī)格。一般野生品有效成分高于栽培品，但家種藥材的栽種規(guī)模較大，生長條件穩(wěn)定，產(chǎn)量大，所以成為目前市場主要商品來源。不同產(chǎn)地及一產(chǎn)地不同地區(qū)的丹參藥材中丹參酮ⅡA含量存在明顯差異，自0.08%～0.67%不等，但其含量與水溶性成分含量無正相關性［2］。
野生丹參的生態(tài)適應強，廣泛分布于我國華北、華東、中南，西北、西南部分省區(qū)也有分布。其商品條短粗，有分枝，表面紅棕色，外皮疏易剝落，質輕脆。從市場調查來看有山東平邑、沂南、沂水、萊蕪，河南盧氏、靈寶、活寧、嵩縣，湖北武當山等地商品［3，4］。
隨著野生資源的減少，20世紀70年代中期丹參已經(jīng)供不應求，在全國許多地區(qū)都開始栽培，栽培種源多來自于當?shù)匾吧尤海袥]有進行人工選擇。栽培品較粗壯，少分枝，表面紫紅色，有縱皺紋，皮細不易剝落，質堅實。全國栽培丹參產(chǎn)量大的有山東、四川、河南、河北、山西、陜西、湖北、安徽等省。商品調查來源有山東臨沂、平邑，河南靈寶、盧氏、洛寧、嵩縣，山西黃城，四川中江、德陽、成都，河北安國、行唐、承德，陜西蒲城、漢中，遼寧凌源，安徽亳州等地。其中川丹參和魯?shù)榱魍ㄖ械?大品牌，一般認為川丹參優(yōu)于魯?shù)ⅰ，F(xiàn)代成分分析發(fā)現(xiàn)，山東、河南、山西產(chǎn)丹參的脂溶性成分的含量較高，河北、陜西、四川產(chǎn)丹參的水溶性成分的含量較高［5］。砂質土壤中生長的丹參有效成分含量較高［6］。
1.2 白花丹參S.miltiorrhiza f.alba是丹參的變型，它主要分布在山東萊蕪山區(qū)。白花丹參為優(yōu)良品種，其(脂溶性和水溶性)有效成分高于原種紫花丹參［7］，在治療上又能有獨到之處，所以近年引起醫(yī)藥工作者和商家的廣泛關注并被逐漸開發(fā)利用，已作為一個新品種被收錄進《山東省中藥材標準》（2000年版），但其野生數(shù)量少，現(xiàn)山東萊蕪市苗山鎮(zhèn)有人工栽培20 ha，周邊鄉(xiāng)鎮(zhèn)分散栽培27 ha，泰安，臨沂引種白花丹參13 ha。這些鄉(xiāng)鎮(zhèn)有種植丹參的傳統(tǒng)，現(xiàn)在多將白花丹參與紫花丹參混種，收獲后再分開銷售。人工栽培及引種的白花丹參與野生的白花丹參相比較，有效成分種類、含量均無明顯差異［8］。
2 丹參代用品類
2.1 甘西鼠尾（大紫丹參、甘肅丹參）S.przewalskii Maxim.及其變種目前作為丹參代用品已成為大量商品藥材之一。甘西鼠尾分布在甘肅文縣、舟曲、康縣、微縣，四川、云南、西藏、青海等地，主產(chǎn)于甘肅、四川、云南，銷往全國。調查結果表明，該品已在全國11個省區(qū)作丹參使用。其變種褐毛甘西鼠尾S.przewalskii var.mandarinorum與甘西鼠尾極相似，藥材性狀甘西鼠尾亦無明顯差異，分布于甘肅、云南、青海、四川、西藏等省。甘西鼠尾與丹參的化學成分不盡相同［9，10］，理化鑒定和抑菌效果相差很大［11，12］，藥材功效不完全一致［13］。但因其丹參酮ⅡA（0.3%～1.24%）和隱丹參酮（1.60%）含量均較高［14，15］，正對川丹參和魯?shù)a(chǎn)生較大沖擊［16］。有學者強烈建議將其增補為藥材丹參的來源之一［10］［17］。從藥源開發(fā)角度考慮，研究提取其總丹參酮和急丹參酮單體成分［18］，為丹參制劑提供原料，也可充分利用這一寶貴資源。
2.2 滇丹參（紫丹參）S.yunnanensis C.H.Wight分布于云南、四川、貴州海拔1800～2900 m的草地、林緣及疏林干燥地上，屬高山丹參類，在云南地區(qū)具有悠久的使用歷史，分布廣，資源豐富，具有較高的開發(fā)利用價值。成分分析顯示，滇丹參與正品丹參相比總丹參酮含量略高，總酚酸含量高約一倍，滇丹參酮ⅡA含量略高，原兒茶醛含量高兩倍［19］，是丹參替代品中質量較高品，與甘西鼠尾一樣已成為當前丹參商品藥材主流品種之一。已有多篇報道研究其藥材性狀、顯微及理化特征［20］和改善急性心肌缺血作用等［21］，為滇丹參藥材的醫(yī)用價值、鑒別及藥材質量標準的規(guī)范化研究提供了科學依據(jù)。
2.3 南丹參S.bowleyane Dunn在浙江和江西等南方省區(qū)作丹參藥用。有研究者報道從南丹參根中分得16個化合物，經(jīng)光譜和理化分析測定，鑒定了其中的10個與丹參相同的兩大類成分［22］，說明其開發(fā)利用的意義。但也有報道檢測10余批次南丹參藥材，其丹參酮ⅡA含量在0.09%～0.12%之間，不符合藥典標準，以其投料生產(chǎn)的復方丹參片也檢測不出丹參酮ⅡA［23］。現(xiàn)流通的南丹參商品藥材大多為野生，也有部分地區(qū)栽培（四川中江）。利用秋水仙堿誘導南丹參多倍體，試圖在改變原種生物特性基礎上提高有效成分含量，進而開發(fā)利用丹參代用品資源的研究在正在進行之中［24］。
2.4 三葉鼠尾（小紅丹參）S.trijuga Diels產(chǎn)于大理、合慶、劍川、洱川、洱源、迪慶、中旬、麗江等地區(qū)，在大理、麗江、中甸地區(qū)作丹參藥用已有較長的歷史。經(jīng)調查分析，小紅丹參中含有效成分丹參酮ⅡA和隱丹參酮，有學者建議可作為丹參的藥用資源加入國家藥品標淮［25］。
3 偽品類
據(jù)調查［1］，［3］，以根和根莖作丹參類入藥的種較多，且成分含量不一而論，主要種摘錄如下：戟葉鼠尾草S.bulleyana，雪山鼠尾草S.evanaiana，裂瓣鼠尾草S.schiaochila，毛地黃鼠尾草S.digitaloides，少毛甘西鼠尾草S. przewalskii var.glabrescens，白花甘西鼠尾草S.przewalskii var.alba，橙色鼠尾草S.aerea，栗色鼠尾草S.castana，蕎麥地鼠尾草S.kiaometiensis，黃花鼠尾草S.flava，長冠鼠尾草S.plectranthoides，河南鼠尾草S.honania，單葉丹參S.paramiltiorrhiza f.prupureoruba，浙皖丹參S.sinica，紫花浙皖丹參S.sinica f.purparea等。以上種分屬弧隔鼠尾亞屬和荔枝草亞屬，主要分布于中低山丘陵，藥材主根不明顯，紡錘形或圓柱形，多分枝，二萜醒類成分大都較低。與正品丹參比較，形似而質次，部分品種作代用品在全國或各省區(qū)流通使用。因近年丹參的開發(fā)利用較為活躍，如從以上品種中提取分離有效成分，均可為補充丹參制劑原料和擴大丹參藥材資源提供新途徑。
另有非丹參類本屬植物，如紅根草S.prionitis，血盆草S.cavaleriei var.simplicifolia，石見穿S.chinensis，關公須S.kiangsiensis，地梗鼠尾草S.scapiformis，佛光草S.substolonifera，鼠尾草S.japonica，荔枝草S.plebeia等，多以全草入藥，具祛風濕、補肺腎、清熱毒、消癰腫等功效，二萜醌類成分含量低或未檢出。這些種類的成分和功效均與丹參有顯著不同，在臨床中使用增加了丹參藥源的混亂，所以，應進行嚴格控制，杜絕進入丹參藥材流通市場。
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【關鍵詞】 代謝組學技術;中藥研究;應用
人類對復雜生命體的認識循著從器官/組織、細胞到基因的方式，現(xiàn)在又回到了以整體性研究為特點的系統(tǒng)生物學(system Biology)的時代，其鮮明的特征是各種“組學”(-omics)研究的繁榮。代謝組學(metabonomics)是繼基因組學(genomics)、轉錄組學(transcriptomics)和蛋白質組學(proteomics)后新興的一種組學方法，是系統(tǒng)生物學的重要組成部分，由Nicholson于1999年首次提出[1]。代謝組學研究的核心思想在于利用現(xiàn)代分析技術定量測定生物體液(如尿液、血漿、組織提取液等)中的內源性代謝產(chǎn)物，考察生物體在不同狀態(tài)下(生理病理狀態(tài)、給藥前后等)其代謝產(chǎn)物的變化，通過代謝物圖的整體分析直接認識生理病理及生化狀態(tài)，結合化學信息學分析方法確定內源性小分子代謝物成分的變化模式，獲得相應的生物標記物群(biomarkers)，表征或揭示生物體在特定時間、環(huán)境下整體的功能狀態(tài)[1，2]。其后又出現(xiàn)了針對植物的代謝組學研究(metabolomics)[3]。如今代謝組學已在藥物毒性及安全性評價、疑難疾病診斷、新藥研發(fā)及藥物作用機制研究等生命科學的多個領域展示了廣闊的應用前景[4，5]。
完整的代謝組學分析流程應包括樣品的采集、預處理、儀器分析與鑒定、數(shù)據(jù)分析及生物標記物意義解讀，最終認識機體生化反應機理和生命現(xiàn)象[6]。主要研究手段包括核磁共振譜(NMR)、氣相色譜-質譜(GCMS)和液相色譜-質譜(LCMS)等各種高通量、高分辨、高靈敏度的譜學技術[7]，特別是UPLCQTOF/MS以其靈敏度高、分析速度快、樣品無需衍生化等優(yōu)點，受到眾多研究者的關注[8]。主成分分析(PCA) 及偏最小二乘法判別分析(PLSDA) 等多元模式識別方法是代謝組學常用的數(shù)據(jù)降維和信息挖掘方法[9]。
中藥“多組分、多靶點、整合調節(jié)作用”的特點及中醫(yī)藥理論的“整體觀、動態(tài)觀、辨證觀”與代謝組學整體性、系統(tǒng)性、綜合性相吻合。因此，以代謝組學為主體的系統(tǒng)生物學研究方法可能是現(xiàn)代科學中可以概括中醫(yī)藥抽象整體觀思想的重要途徑。作者遴選了近年來國內外學者在中藥代謝組學研究領域頗具代表性的論文作一綜述，希望能夠為讀者提供一定參考。
1 代謝組學技術在現(xiàn)代中藥研究中的應用
1.1 代謝組學與中醫(yī)證候模型的研究
辨證論治是中醫(yī)藥的特色與精華，“證”是機體在疾病發(fā)展過程中某一階段的病理概括。建立中醫(yī)“證”動物模型是開展符合中醫(yī)藥理論藥效評價的重要前提，由于中醫(yī)“證”的主觀不確定性，缺乏合適的動物模型建立與評價方法，根據(jù)不同種屬、不同品系動物模型與人的代謝狀態(tài)的差異，以特征性標記物為參考，尋找模擬人類疾病且適用于藥效和毒性等研究的動物模型，將成為代謝組學的重要應用領域之一。Chen[10] 應用經(jīng)典的氫化可的松造大鼠腎陽虛證模型方法，采用GCMS和模式識別技術對模型大鼠的尿液進行內源性代謝物分析，發(fā)現(xiàn)在氫化可的松誘導下動物初期的代謝活動尤其是能量相關代謝明顯增強，兒茶酚胺生物合成通路在藥物誘導下加速，腎陽虛模型大鼠造模前后，代謝網(wǎng)絡明顯偏離出給藥前的平衡狀態(tài)并隨時間不斷變化。對慢性束縛應激大鼠(肝郁脾虛模型)的血漿代謝表型改變的研究發(fā)現(xiàn)：模型組醋酸、乳酸、酪氨酸、低密度脂蛋白等發(fā)生較大變化，提示動物能量代謝及脂肪、蛋白質代謝功能異常，與已知的應激狀態(tài)動物體內代謝的調節(jié)過程及結果相一致[11]。
1.2 代謝組學與中藥整體療效、藥效物質基礎及作用機制的研究
對中藥療效的評價、物質基礎及作用機制的研究基本上都是沿用化學藥的方法，即使引入了細胞分子生物學的研究加深了認識，但從目前的研究結果分析，中藥基本上沒有優(yōu)于化學藥的作用特點可言，可能我們忽視了其“君臣佐使”、“升降沉浮”等理論和整體性作用機制很難在單一機制的藥理模型和分子水平加以詮釋，這就需要建立適用于中藥多組分、多靶點整體綜合效應的藥效評價體系，采用代謝組學的方法來對比分析服用中藥前后機體內體液之間所存在的不同，來證實中藥的療效，可能成為未來系統(tǒng)生物學研究中藥的重要手段。利用GCMS方法觀察人參總皂苷對急性冷應激的作用發(fā)現(xiàn)[12]：大鼠處于-10 ℃環(huán)境中2 h，一方面交感神經(jīng)系統(tǒng)活動的增強導致兒茶酚胺代謝通路的上調，可以調動機體抵御外來侵害;另一方面，糖皮質激素分泌的增加，尤其是興奮性氨基酸的大量分泌會對神經(jīng)內分泌系統(tǒng)、海馬區(qū)和血腦屏障造成潛在的損害;三羧酸循環(huán)和色氨酸代謝可以發(fā)揮自身代償調節(jié)機制;腸道菌群在冷應激反應中也發(fā)揮了重要作用。預防性給予人參總皂苷(100 mg/kg)14 d，可以有效減弱機體對急性冷應激的反應。Zhao[13]利用UPLCQTOF/MS技術研究了沙棘對急性血瘀癥引起的代謝紊亂的逆轉作用，且呈劑量相關性，涉及的代謝通路有膽汁酸的生物合成、氨基酸如苯丙氨酸、色氨酸和犬尿酸等的代謝，這些都與血脂水平息息相關。羊藿可以使氫化可的松致腎陽虛大鼠代謝譜的偏移恢復到正常位置[14]。以金黃色葡萄球菌為實驗對象，結合9種已知抗菌機制的抗生素，基于HPLCDAD技術和PCA來確證尖萼耬斗菜(Aquilegia oxysepala)和彭縣雪膽(Hemsleya pengxianensis W.J. Chang)的抗菌作用模式和主要活性成分。發(fā)現(xiàn)前者與氯霉素、紅霉素等的作用機制相同即作用于細菌蛋白質合成過程[15]，后者抑制細胞壁合成與萬古霉素作用機制類似[16]。利用代謝組學方法確證了兩種植物的主要活性成分分別是木蘭花堿(magnoflorine)和雪膽素甲(dihydrocucurbitacin F25Oacetate)。角叉菜膠致大鼠足腫脹是考察藥物抗炎作用常用的方法，Xie[17]利用實驗室常用的HPLCUV技術結合PCA觀察到六味地可以有效恢復炎癥引起的代謝網(wǎng)絡的改變。二甲肼誘發(fā)大腸癌模型組大鼠的代謝譜具有隨時間逐步偏離起始點的趨勢，而金復康口服液干預組大鼠的代謝譜則表現(xiàn)出先偏離再回歸起始點的代謝譜變化軌跡，研究結果與病理實驗結果一致。三羧酸循環(huán)、色氨酸循環(huán)、多胺代謝等代謝通道的波動，以及腸道菌群代謝的紊亂與二甲肼誘導的大腸癌癌前病變相關[18]。四氯化碳致小鼠肝損傷后，小鼠機體能量代謝、氨基酸代謝及脂類代謝都受到不同程度的影響，水飛薊賓能有效地緩解四氯化碳所造成的體內線粒體功能及氨基酸代謝紊亂[19]。
1.3 代謝組學與中藥安全性和毒性研究
由于歷史、習慣、地域等原因，同一種藥材可能來自不同的植物，不同的藥材間也存在代用、混用等問題，這為中藥的安全性埋下了隱患，但長久以來并未引起足夠的重視。在20世紀90年代初出現(xiàn)了在比利時服用含中藥廣防己的減肥藥導致腎功能衰竭的報道[20]，中草藥的安全性問題引起了國內外的廣泛關注，而且對中草藥的聲譽造成極大的損害。現(xiàn)在認為引起毒性的主要是馬兜鈴酸類成分。灌服馬兜鈴酸大鼠的尿樣代謝物發(fā)生明顯改變，同型半胱氨酸形成和葉酸循環(huán)加速，而同型半胱氨酸的再甲基化和花生四烯酸的生物合成減少，這些均與潛在的腎損傷有關[21]。關木通染毒大鼠的尿液中氧化三甲胺、檸檬酸 牛磺酸、肌酐、甜菜堿等代謝物均有不同程度的下降，而醋酸、丙氨酸則顯著上升，這些化合物的變化與已報道的腎毒性化合物引起的變化相似[22]。朱砂[23]和雄黃[24]是常用的礦物藥，其主要成分分別是HgS和As2S2，利用NMR技術結合PCA、PLSDA可以觀察到它們可能對機體能量代謝、氨基酸代謝和腸道菌群產(chǎn)生“擾動”作用，對肝、腎產(chǎn)生一定的毒性作用。
1.4 代謝組學與中藥質量控制研究
同一種藥材由于生長環(huán)境、采收季節(jié)及加工方式等的不同，其所含化學成分可能有很大差異。現(xiàn)階段中藥的質量控制主要是對一個或幾個指標成分或活性成分進行定性鑒別和定量測定，這種方式的缺點是顯而易見的。近年來國家大力推廣指紋圖譜技術，但應用還不十分廣泛。Holmes E[25]和Kooy van der F[26]綜述了近年來基于NMR和MS技術的中藥質量控制的代謝組學研究，文中詳細闡述了各種技術的優(yōu)缺點、實驗方法與步驟，其中的實例可提供一定的參考。對不同生長階段的青蒿和法呢基焦磷酸合酶過渡表達的轉基因青蒿的研究顯示：兩類植物在5個生長階段化學成分都有明顯的變化，兩類植物在花蕾期和開花期成分差別明顯，從青蒿酸和二氫青蒿酸轉化為青蒿素的轉存率在生長期間可能存在制約瓶頸[27]。采自不同地域(氣候條件不同)和采用不同加工方式的日本當歸(Angelica acutiloba)，首先由經(jīng)驗豐富的藥工判斷為高、中、低不同的品質，然后利用GCTOF/MS技術結合PCA分析其質量的差異。質量差的當歸(采自寒冷地區(qū))果糖和葡萄糖的含量遠高于中、高質量的當歸，提示溫暖的氣候有利于當歸品質的提升。不同干燥方式的當歸質量也有很大的差異[28]。
在長期的用藥實踐中，中藥形成了自己獨特的炮制工藝。中藥炮制主要的目的一方面是增強或改變藥物的性能，另一方面是降低毒性，這必然涉及化學成分的變化。借鑒代謝組學的思路與技術，結合多變量統(tǒng)計分析方法，就可能識別并鑒定炮制過程中發(fā)生變化的成分甚至是微量成分。針對生、熟三七(Panax notoginseng)在傳統(tǒng)中藥中作用的不同，Chan[29]利用UPLCQTOF/MS技術結合PCA對二者化學成分進行了全面綜合的研究。文章首先探討了UPLC技術在化合物保留時間高重現(xiàn)性的優(yōu)勢，對人參皂苷類化合物，負離子掃描模式靈敏度比正離子模式高7～18倍，但正離子模式可以提供更多的結構碎片信息以輔助結構解析。最后，從生、熟三七中分別找到了74和146個標志性化合物用以區(qū)分二者，并對其中的部分化合物如Rh4、Rk3進行了結構鑒定。
1.5 代謝組學與中藥活性成分代謝產(chǎn)物研究
藥物代謝產(chǎn)物的研究主要有體外(主要利用肝細胞、微粒體和重組人細胞色素P450等)和體內(主要利用放射性同位素標記的方法)方法，對于中藥這樣復雜的體系而言，都存在明顯的缺陷。正常動物給藥前后其體液成分會發(fā)生明顯的變化，這種變化來自于兩個方面，一方面是藥物代謝的產(chǎn)物，另一方面是藥物引起的機體內源性成分的變化。利用現(xiàn)代各種高通量、高分辨、高靈敏度的儀器如UPLCQTOF/MS并結合多變量統(tǒng)計分析就可以很容易檢測并鑒定這些變化。Plumb[30]首先提出利用代謝組學的方法進行藥物代謝產(chǎn)物研究的設想，并利用化學物GSKX(一個處于研發(fā)階段的藥物)驗證了這種思路的可行性，與放射性同位素標記的方法相比可以得到同樣的代謝產(chǎn)物。Chen[31]對以上的設想進行了發(fā)展，提出了4種基于代謝組學方法的藥物代謝產(chǎn)物研究的方法，并詳細論述了其操作方式。基于以上的這些思路，對檳榔堿和檳榔次堿的代謝產(chǎn)物進行了研究，共鑒定檳榔堿代謝產(chǎn)物11個，新的代謝產(chǎn)物N甲基哌啶甲酸來自于碳碳雙鍵的還原反應，新的檳榔次堿的代謝產(chǎn)物是其單酰甘油酯[32]。對檳榔堿1氧化物的研究發(fā)現(xiàn)了哺乳動物中新的代謝途徑：羧基還原成醛基[33]。
2 討論與展望
代謝組學作為一種新興的學科，其新穎的學術思想和強大的發(fā)展?jié)摿σ盐巳澜绫姸嗫茖W家的關注，國際知名學術刊物Nature、Journal of Proteome Research、Analytical Chemistry等在近幾年連續(xù)出版了有關代謝組學的綜述和研究論文。國內起步也相對較早，已有多所大學和科研院所進行了相關的研究。從國家自然基金的資助情況看，據(jù)作者統(tǒng)計，2003年開始有1項獲資助，2007和2008年分別為24和20項(數(shù)據(jù)來自國家自然科學基金委網(wǎng)站)，相信隨著研究的深入，在今后一段時間將會有更多的項目獲得資助。
從目前的研究結果來看，已利用代謝組學的方法對證候動物模型、中藥的整體療效及作用機制、安全性及質量控制等進行了一定的研究，獲得了相關“證模型”的生物標志物，為闡釋中醫(yī)證候的生物學本質和病癥治療提供了證據(jù);初步建立了適用于中藥多組分、多靶點整體綜合效應的藥效評價及作用機制研究、安全性評價及質量控制的方法[10-28]。把代謝組學的技術即高分辨、高靈敏度的現(xiàn)代儀器分析技術如NMR、LCMS等和多變量統(tǒng)計分析方法引入中藥炮制和代謝產(chǎn)物的研究，可以說是一種延伸，利用這種方法可以發(fā)現(xiàn)炮制過程中發(fā)生變化的微量活性成分和微量代謝產(chǎn)物，目前開展的工作雖然并不是很多，但已顯示了其巨大的潛力[29，32，33]。
眾所周知，中醫(yī)藥認識疾病的方法、理論均缺乏合適的現(xiàn)代科學表達體系，目前仍是一種不能與現(xiàn)代醫(yī)學相兼容、相通的“語言”。中醫(yī)藥和代謝組學的學術思想方法具有內在相通性：整體性，因而，以代謝組學為主體的系統(tǒng)生物學研究方法可能是認識中醫(yī)藥抽象整體觀思想的重要途徑。長期以來，對中藥藥效和作用機制的研究一直沿用化學藥物的方法，試圖證明哪些成分在起作用，作用于哪個靶點，但是傳統(tǒng)用藥一般是口服，藥物首先要經(jīng)過胃腸道的吸收才能發(fā)揮作用，腸道微生態(tài)菌群[34]有可能是一個被忽略的區(qū)域，中藥有可能通過非直接作用對機體產(chǎn)生效應，引入反映整體觀念的代謝組學有可能解開中藥作用的神秘面紗。運用代謝組學研究技術，根據(jù)不同種屬、不同品系動物模型與人的代謝狀態(tài)的差異，以特征性標記物為參考， 結合傳統(tǒng)的中醫(yī)理論，探索新型中醫(yī)證動物模型的制作方法將具有十分重要的科學意義。代謝組學方法比傳統(tǒng)方法能更快、更準確地發(fā)現(xiàn)毒性物質和毒性規(guī)律，尤其是多層次、多靶點的綜合毒性反應，結合經(jīng)典的分子生物學手段，將對中藥毒性進行整體-局部-系統(tǒng)的全面理解，進而指導中藥臨床安全用藥。代謝組學最成功的應用是英帝國理工大學的Nicholson主持的COMET(consortium for metabonomic toxicology)研究[4]，這項研究由輝瑞等5家制藥廠資助，旨在利用NMR技術獲取具有肝腎毒性的化學品所致的嚙齒類動物血液和尿液代謝指紋圖譜，建立專家預測系統(tǒng)用以臨床前候選化合物的毒性篩選，以降低新藥研發(fā)的風險和費用。《神農(nóng)本草經(jīng)》中記載的“下品”多有毒性，中藥所致毒性與化學品是否相同?還是有自己獨特的特點?我們能否借鑒COMET研究的經(jīng)驗建立具有中醫(yī)藥特色的專家預測系統(tǒng)?這同樣可以降低新藥研發(fā)的風險和不良反應的發(fā)生。應用代謝組學技術對藥材不同生長狀態(tài)下的不同代謝物組作為一個整體來進行考察，用于藥材質量控制，注重中藥指紋圖譜所忽視的分子本質和初生代謝物的影響，更具全面性和優(yōu)越性，將更進一步解決中藥質量控制的復雜性難題，占領傳統(tǒng)藥物質量技術標準制定的制高點。
目前，中藥代謝組學的研究已取得了喜人的成果，但也應看到，當前代謝組學的研究還處于模式識別和生物標記物鑒定的層次，即無效或有效、對哪些代謝通路產(chǎn)生了影響，如何基于代謝組學研究結果，對中藥整體藥效作用進行定量表征，闡明中藥整體藥效作用區(qū)別于相應單靶點化學藥物的作用特點，如何與經(jīng)典的形態(tài)、功能學相聯(lián)系，如何與基因組學、轉錄組學、蛋白質組學整合獲得中藥作用的全面綜合的認識，可能是下一步需要思考的問題，探索性的研究為我們提供了一定的參考[35]。
代謝組學為廣大的從事中藥研究的科研工作者提供了嶄新的思路與視角，在現(xiàn)有化學、藥理或毒理的研究基礎之上，引入系統(tǒng)生物學尤其是代謝組學的研究思路，伴隨著各種高分辨率、高靈敏度的分析技術、多變量統(tǒng)計分析方法[36]和代謝網(wǎng)絡數(shù)據(jù)庫[37]的不斷完善及各種技術標準[6，38-41]的建立，有可能搞清楚中藥的物質基礎、 作用機理、配伍規(guī)律、代謝產(chǎn)物和毒副作用等，它有可能使有著幾千年歷史、以經(jīng)驗為基礎的中藥治病向以科學的方法和標準為基礎的現(xiàn)代化的中藥治病轉變，從而對中醫(yī)藥事業(yè)長遠地健康發(fā)展產(chǎn)生深遠的影響。
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【關鍵詞】 金銀花；質量控制；指紋圖譜；多成分質量評價；綜述
金銀花，又名忍冬花，為忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾，收載于《中華人民共和國藥典》(以下簡稱“《中國藥典》”)1963年版中，1977－2000年歷年版《中國藥典》從臨床療效、地區(qū)習慣用藥和商品供應等方面綜合考慮，規(guī)定把忍冬(Lonicera japonica Thunb.)、紅腺忍冬(L.hypoglauca Miq.)、山銀花(L.confusa DC.)和毛花柱忍冬(L.dasystyla Rehd.)的干燥花蕾或帶初開的花作為金銀花的基原。為了正本清源，2005年版《中國藥典》[1]又改回忍冬L.Japonica Thunb.作為金銀花的唯一來源，而其他品種則作為山銀花的基原。事實上，全國各地習用品種遠不止于此。全球忍冬屬植物約200種，我國有98種，廣泛分布于全國各省區(qū)，而以西南部種類最多，習用品種多達47種。筆者在系統(tǒng)查閱國內外文獻的基礎上，就金銀花在質量控制方面的研究進行了總結歸納，并對其中存在的問題提出一些拙見，僅供參考。
1 金銀花質量控制采用的主要方法
近年來，業(yè)界對于金銀花成品質量的評價主要集中在化學分析方面，特別是對綠原酸含量測定已相對成熟。綠原酸是金銀花的主要有效成分之一，不但作為其原藥材的質量控制指標，也是一些成藥和制劑的質量控制指標。但研究發(fā)現(xiàn)，金銀花中含有較大量的三萜皂苷類和環(huán)烯醚萜類等成分，它們和酚酸類成分一起共同構成了金銀花的有效成分群。因此，僅以綠原酸作為唯一控制指標是不全面的。為了彌補采用單一成分含量測定來評價藥材質量之不足，近幾年，對金銀花指紋圖譜的研究成為了焦點，以期利用指紋圖譜來控制藥材的質量。然而，指紋圖譜的模糊性和缺乏譜-效的研究基礎，使其在實際質量控制中難以廣泛推廣。為此，學術界又提出了多指標質量控制模式，它也將成為2010年版《中國藥典》修訂的趨勢和導向，以期使我國的藥品標準更能反映中藥的內在質量。目前在質量控制技術和手段上主要包括紫外-可見分光光度(UV-Vis)法、薄層掃描(TLCS)法、毛細管電泳(CE)法、傅立葉變換紅外分光光度(FTIR)法、氣相色譜(GC)法、高效液相色譜(HPLC)法、液-質聯(lián)用技術(HPLC-MS)等，且以HPLC法最為普及。
1.1 紫外-可見分光光度法
UV-Vis法主要有單波長和差示導數(shù)分光光度法，如綠原酸的含量測定方法在不斷改進后，使分析的精密度明顯提高。UV法測得的是具有相同發(fā)色團的總含量，而不是單一成分的含量，所得到的含量測定結果有時也僅是參考，如金銀花在煮沸后綠原酸降解54.05%(HPLC法)，而UV法卻顯示其含量未變[2]。為增強UV測定法的專屬性，近年來在其測定原理、介質選擇、特征性顯色劑[3]等方面進行了研究，如利用鎢酸鈉與綠原酸瞬間反應后發(fā)生特征峰位移，而其他成分則不發(fā)生反應[4]；綠原酸在檸檬酸鈉介質中更穩(wěn)定[5]。
1.2 薄層掃描法
此方法集中在對金銀花的主要成分綠原酸的含量測定上。色譜及掃描條件：吸附劑主要有硅膠 G和聚酰胺薄膜，前者多以醋酸丁酯-甲酸-水的上層溶液為展開劑，常見比例28∶10∶10，多采用單波長330 nm作為檢測波長，反射法程序掃描[6-7]；后者多以異丙醇-甲酸(10∶0.5)為展開劑，用熒光光度法方式鋸齒掃描，激發(fā)波長為254 nm[8-9]，試驗中采用熒光光度法檢測，靈敏度較高，可消除黃酮類成分引起的背景干擾。
1.3 毛細管電泳法
采用CE法，以含有10 mmol/L磷酸鹽和20 mmol/L硼酸鹽的pH 7.0的緩沖溶液為背景電解質，可以在15 min內完成金銀花和含金銀花的8種中成藥綠原酸的測定[10]。在CE中，有機溶劑常作為改性劑加到緩沖液中，以改善分離。研究表明，隨著緩沖溶液中乙醇濃度增加，綠原酸的遷移時間呈現(xiàn)增長，但當緩沖溶液中乙醇含量過高時，會導致綠原酸的遷移時間過長，不利于快速分析[11]。
1.4 紅外光譜法
目前該法主要用于鑒別上，如用FTIR可根據(jù)峰形、頻率，結合指紋區(qū)吸收峰的差別，快速、準確地辨別金銀花道地性。四川產(chǎn)金銀花與道地品的譜圖在波數(shù)和吸收峰形狀上都有較明顯的差異，河北與山東產(chǎn)金銀花譜圖基本一致。道地品在1734/cm處有一弱吸收，山東、河北兩地品種在此處幾乎無吸收；在1522/cm處，道地品是一組弱小的吸收組峰，其他產(chǎn)地的吸收峰為強度略強的獨立峰或分裂峰；在1155～1045/cm范圍內，道地品的峰形較尖窄，山東、河北品種的吸收峰是較寬平的分裂峰[12]。
1.5 氣相色譜法
GC可用于金銀花中蒎烯、龍腦、芳樟醇、檸檬烯等揮發(fā)性成分的測定。田氏等[13]以芳樟醇為參照物，建立的金銀花氣相指紋圖譜穩(wěn)定性、重現(xiàn)性好、特征性強、峰面積比值及其差值、非共有峰面積均符合規(guī)定，能夠系統(tǒng)反映其揮發(fā)性成分的全貌，結果穩(wěn)定可靠。刑氏等[14]采用氣相色譜-質譜聯(lián)用技術(GC-MS)對水蒸氣蒸餾法(SD)所提金銀花揮發(fā)油的化學成分進行了分析，共鑒定了21個成分，占全油的92.02%，并確定了各成分在揮發(fā)油中的百分含量。
1.6 高效液相色譜法
綠原酸類成分的HPLC分析始于20世紀70年代末，在分離定量方面具有分離效果好、精密度高、準確、快速、樣品制備簡單等優(yōu)點，從而得到廣泛的發(fā)展和應用。綠原酸類成分的分析檢測正相、反相HPLC均有應用，所使用的層析柱和固定相有近10種，應用較多的為ODS柱等。在分析中，流動相采用最多的為乙腈-水。采用ODS柱時，多采用梯度洗脫，另在流動相中加入磷酸鹽緩沖液等可較好地改善分離度。
為了適宜復方成分復雜的需要，近年來在新型檢測器應用方面的發(fā)展很快，如運用二極管陣列檢測器(DAD)可得到三維圖譜，適用于成分復雜、且無紫外吸收的成分分析；對于復雜體系分離的另一個共性技術就是采用梯度洗脫，以保障分析對色譜峰的要求[15-16]。
在質量控制指標方面，結合木犀草素等黃酮類成分的藥理作用和金銀花的功效，有人認為它亦是金銀花的有效成分之一[17-18]，因此，2005年版《中國藥典》(一部)增加了用該指標來控制金銀花的質量。其實，木犀草素等黃酮類成分在忍冬葉中的含量較高，而在金銀花中的含量很低，但采集金銀花時是不能有葉的，因此以木犀草素作為金銀花的控制指標之一是值得商榷的。
1.7 液-質聯(lián)用法
HPLC-MS法因其靈敏度高、能提供豐富的碎片峰信息、兼顧定性定量雙重作用的優(yōu)勢，在金銀花質量控制中得到了越來越廣泛應用。如分析不同時期金銀花中酸性成分及含量變化以及發(fā)現(xiàn)和驗證了綠原酸的2個同分異構體和異綠原酸的2個同分異構體[19]，并對不同時期金銀花中6種成分的含量變化進行了考察，在不同時期金銀花中該6種成分的含量由高到低的順序應該是三青期、二白期、大白期、銀花期、金花期。因此，金銀花采摘的最佳時期應該為花開的早期階段，該結論與其他文獻報道一致。
其他方法還有流動注射化學發(fā)光分析法[20]、微柱高效液相色譜法[21]、膠束薄層色譜掃描法[22]等。
2 存在的問題
綜合上面的研究報道，在金銀花的質量控制方面，單一有效成分含量測定已經(jīng)有了比較成熟的方法，近幾年，學術界對金銀花液相色譜指紋圖譜做了較多的研究，但主要集中于以綠原酸單一化學成分為指標的指紋圖譜。然而研究發(fā)現(xiàn)，黃酮類、三萜皂苷類和環(huán)烯醚萜苷類成分亦是金銀花的有效成分，因此，僅以綠原酸作為質量控制指標存在一定的局限性。目前已有用多個成分同步測定來控制金銀花質量者，但這種質量控制方法很難應用到實際的科研、生產(chǎn)和市場監(jiān)督中，其中一個重要原因就是這些對照品的供應嚴重不足，限制了該方法的應用。對照品的奇缺已經(jīng)成為制約多成分質量控制方法在金銀花品質評價、生產(chǎn)和監(jiān)督中應用的瓶頸。多指標定量評價模式適合于中藥的質量控制，但該方法要求有足夠量的化學對照品的供應。目前，單成分質量控制尚缺乏對照品供應，更不用說多指標成分的質量控制模式。化學對照品由于分離難度大、單體穩(wěn)定性差，導致市場供應缺乏、價格昂貴，難以滿足生產(chǎn)、質量監(jiān)督和科研的需求，造成“研究論文多，實際應用少”的尷尬局面，因此，該模式也僅限于科研，難以應用到實際質量監(jiān)督和評價中。那么，如何合理表達金銀花的質量，建立什么樣的質量評價體系才能盡快滿足金銀花的生產(chǎn)、應用和市場監(jiān)控等的需要是一個值得深入研究的技術難題。
3 展望
能否通過中藥有效成分間存在的內在函數(shù)關系和比例關系，僅測定1個成分(對照品可以得到者)，來實現(xiàn)對多個成分(對照品沒有或難以得到者)的同步監(jiān)控，這是“一測多評”的基本設計思想。一測多評的研究思路側重從量上闡明主要成分或藥效成分間的相互關系，校正因子的運用能夠實現(xiàn)在對照品短缺的情況下多指標成分的含量測定。王氏等[23]以木通藥材為例，采用一測多評模式對其中3種皂苷類成分進行同步測定，對該技術適用性和應用可行性進行了探索和評價。一測多評的研究思路在木通藥材中得到驗證，有望成為適合中藥特點的多指標質量評價新模式。此方法正嘗試應用于金銀花及其制劑的質量控制。
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關鍵詞 電噴霧 質譜 定性分析 藥物代謝 蛋白質研究
近年來，隨著醫(yī)藥的不斷發(fā)展，天然藥物化學中天然產(chǎn)物的提取產(chǎn)物，藥物分析中生物體內的代謝研究，還有生物化學中具有生理活性的多肽和蛋白質，逐漸成為當前研究熱點[1]；后基因組學的蛋白組學，在目前也顯得相當活躍，而其中很多高極性、難揮發(fā)、熱不穩(wěn)定的大分子有機化合物出現(xiàn)，對其檢測有難度。質譜作為一種分析檢測手段已經(jīng)出現(xiàn)幾十年，電噴霧質譜（ESI-MS）也已發(fā)展十幾年，成為一種通用質譜技術，它所涵蓋的分析應用領域極其廣泛，電噴霧質譜的出現(xiàn)解決不揮發(fā)和熱不穩(wěn)定等化合物的分析，應用于中、高極性的化合物，可以檢測的分子質量范圍從300～2000u的小分子化合物到分子質量超過15000u的生物大分子[2]，對于蛋白質、核酸等生物大分子在電噴霧質譜中容易形成多電荷峰，分子量測定準確度高，現(xiàn)今電噴霧質譜成為藥學和生物醫(yī)學研究領域重要的標志性工具，在定性腫瘤差異蛋白方面更是重要的工具，擁有良好的前景。
1 電噴霧質譜特點
1.1 電噴霧質譜的發(fā)展
電噴霧和質譜成功地結合，是由Dole及其合作者在1968年中首次闡述；1984年Yamashita和Fenn發(fā)表的論文更清晰地闡述電噴霧電離機理，并認為可以用作液質聯(lián)用（LC/MS）的接口；20世紀90年代，儀器制造和實際應用都表現(xiàn)出高速增長和全面發(fā)展的態(tài)勢。1989年，報告ESI離子源與傅里葉變換離子回旋共振質譜聯(lián)用成功范例；1991年，Sin，Boyle和Whitehouse報道電噴霧/飛行時間質譜，實現(xiàn)更高的準確度，更高的分辨率；隨后離子阱電噴霧質譜、電噴霧-四級桿-飛行時間串聯(lián)質譜儀（ESI-Q-TOF-MS）為代表的儀器在各行業(yè)應用開來。
1.2 電噴霧過程
將溶于極性、揮發(fā)性溶劑（如甲醇，乙腈，丙酮等）的樣品溶液通過電噴針傳輸，在電場作用下形成泰勒錐，在電噴針尖部形成霧狀正或負離子富集，液滴通過溶劑的揮發(fā)逐漸縮小，其表面上的電荷密度不斷增大；當電荷之間的排斥力克服表面張力時，液滴分裂，產(chǎn)生單個多電荷離子；生出的樣品氣相離子經(jīng)質量分析器分析，從而測出它們的質荷比[3～6] 。
1.3 電噴霧電離的優(yōu)勢
電噴霧電離為一種軟電離方式，即給樣品較小的電離能量，可以得到不穩(wěn)定化合物的分子離子峰，且譜圖簡單，主要用于定性分析。Loo等 [7]歸納出電噴霧質譜的4“S”特點：即靈敏（ Sensitivity）、快（Speed） 、專一（Specificity），并能直接給出化學計量比（stoichiomotry）。電噴霧質譜的成功在于2個重要的部分，電噴霧提供相對簡單的方法使非揮發(fā)性的溶劑形成氣態(tài)，與此同時質譜提供更直接、靈敏度好的檢測[8]。電噴霧質譜可以檢測阿摩爾級別濃度的樣品[2]，并且ESI可在一級質譜（MS）條件下獲得很強的待測物準分子離子峰，并且可借助MSn（n=2～10）對準分子離子進行多級裂解，進而獲得更為豐富的結果信息[9]。ESI已成為一種成熟、高靈敏、快速的質譜技術。比較質譜的離子源（見表1），可以看出ESI的優(yōu)勢所在。
2 近期電噴霧質譜進展
近年來，電噴霧質譜已經(jīng)不限于小分子的檢測，伴隨著蛋白組學、基因組學的發(fā)展，帶動生物大分子分析的發(fā)展。蛋白等大分子化合物樣品量少，不適合過于復雜的預處理過程，很多專家致力于提高該技術的離子化效率及減少樣品預處理過程，能對復雜基體中的分析物進行簡單、快速、實時分析。新發(fā)展出極低流速下的電噴霧質譜，被稱為納升電噴霧質譜（nanoESI/MS），電噴霧流速采用納升級流速，流速低，產(chǎn)生的液滴體積小，穩(wěn)定液流的流量越低，則電離效率幾乎隨之成比例地提高，對于蛋白樣品量小的物質可以減少樣品消耗量，又不會減弱信號強度，導致去溶劑化效率、離子化效率及離子轉移至分析器的效率都比常規(guī)ESI源高，而且噴霧穩(wěn)定性好[10]。對于電噴霧電離方式也發(fā)展出電噴霧解吸電離DESI、電噴霧萃取電離EESI 等，表2中按先后順序總結電噴霧電離方式的發(fā)展。這些電離方式大多不經(jīng)過樣品預處理，可以進行實時、快速的質譜分析。
電噴霧的首要問題是樣品的高純度，因為一些不純的物質易導致毛細管噴霧堵塞。近些年來，為避免ESI 堵塞，出現(xiàn)一些非毛細管噴射技術，這些技術利用不同的材料尖端形成電噴霧，如銅線及不銹鋼針，用放電針為材料，直接離子化，避免毛細管堵塞現(xiàn)象，樣品損失也減少，更適合微量樣品的檢測。最近，紙、牙簽等尖端噴霧技術都成功地用于復雜混合樣品的分析，使紙兼有導電和分離的作用，這項技術可以檢測很多組織，對于醫(yī)藥中穿刺活檢都可以進行檢測，使得檢測更方便、快捷[11]。
電噴霧質譜一般與液相質譜聯(lián)用較多，進行分離鑒定，而一些新的液相色譜（ LC） 分離技術，例如超高效液相色譜（ UPLC） 和快速高分離液相色譜（ RRLC），研究新液相色譜和電噴霧質譜的連接，更好、更快地完成醫(yī)藥測定鑒定過程。郭小芳等[12]采用RRLC-ESI-MS方式在20min測定生物堿類成分，馬長振等[13]用UPLC-ESI-MS測定白茅根的分析，僅在35min內完成鑒定工作。這些新出現(xiàn)的電噴霧質譜都為更好、更快、更高效地進行分離鑒定做出積極貢獻。
3 電噴霧質譜在醫(yī)藥中的應用
3.1 定性分析藥物及天然產(chǎn)物
電噴霧質譜可以進行多級質譜，電噴霧軟電離方式，導致一級全掃描質譜中主要得到的是分子離子峰，這種分子離子峰能反映被測物組成的分子量信息；二級串聯(lián)質譜（MS2）可直接對粗分離物中的已知成分進行快速鑒定，還可以對樣品中具有相同生藥來源的未知化合物進行結構預測。這為天然產(chǎn)物的物質組成分析提供一種簡單、快速、靈敏的方法，簡化繁瑣的分離、純化過程[14]。
天然產(chǎn)物是新藥開發(fā)的重要部分，目前使用的很多藥物都直接或間接來自天然產(chǎn)物。許國旺等[15]人采用傅里葉變換電噴霧質譜用于鑒定丙二酰基人參皂苷，加入甲酸銨流動相進行優(yōu)化，選定濃度為15mM，譜圖效果最好，電噴霧為負離子模式，丙二酰基人參皂苷的多級質譜具有特征的中性丟失信息，中性丟失44，根據(jù)此特點，可用于該類化合物的定性分析，而最終測定結果均通過準確質量驗證，實驗測定值與理論值偏差小于2ppm，提供準確、靈敏的方法。張道來等[16]人采用正離子模式，在60min內鑒定羅氏車盤車樣品的13種化合物，還對刺身皂苷進行分析，實驗證明高效液相色譜-電噴霧質譜法能克服皂苷類物質分子內由于寡糖鏈存在導致難鑒別的困難，對于皂苷類化合物的鑒別及結構分析中顯示越來越重要的作用。李娟等[17]等對青蒿素類藥物的質譜裂解特征進行分析，采用注射泵直接進樣，正離子分析模式，對準離子峰進行碰撞誘導解離（CID） 研究，更好、更快地研究青蒿素的代謝以及結構分析。大黃類化合物也是天然產(chǎn)物，馬小紅等[18]采用正負離子全掃描，同樣進行CID二級掃描，負離子掃描得到譜圖更清晰，更好地做好特征分析。胡楊等[19]等發(fā)現(xiàn)采用負離子模式，川穹質譜響應度高，進而對川穹進行化學成分分析。吳茱萸也是傳統(tǒng)中藥，高鵬等[20]采用正負離子模式分別研究裂解方式，并發(fā)現(xiàn)負離子的響應更高、定量更好，對今后半萜吲哚類生物堿的鑒定檢測提供一定實驗基礎。李麗等[21]利用電噴霧質譜分析鑒定防風中的未知成分，采用正離子模式。
而對于抗生素，廖瓊峰等[22]人研究慶大霉素采用電噴霧正離子模式，對其碎片峰進行分析，二級離子打碎，打碎脫去C環(huán)（氨基葡萄糖）碎片，說明C環(huán)與脫氧鏈霉胺之間的碳-氧鍵容易斷裂，可更好地用于今后慶大霉素定性和定量分析。抗生素在食品中的應用近年來也大受關注，采用UPLC/MS/MS，乙腈、七氟丁酸水溶液作為流動相，采用正離子電噴霧模式，多反應離子監(jiān)測（MRM），僅需時3min，精確度、準確度良好。方東升[23]利用電噴霧質譜為軟電離方式，在全掃描一級質譜圖上主要得到的是分子離子峰，通過分析直接得到化合物的分子量，從而推測出金霉素樣品中的雜質成分，快速地對金霉素進行監(jiān)控。朱侃等[24]采用質譜等一系列方式測定頭孢克洛的結構，采用正離子模式得到頭孢克洛的特征峰和純度。霍佳麗等[25]采用ESI-Q-TOF-MS青霉素類抗生素、頭孢菌素類抗生素及喹諾酮類藥物進行穩(wěn)定性研究。顯示出快速穩(wěn)定、所需樣品少等優(yōu)點，為今后電噴霧質譜在抗生素方面的應用做一定基礎研究。
電噴霧質譜在中藥配伍方面也有很重要的影響，越皓等[26]人研究附子不同配伍藥對生物堿的影響和附子中雙酯型生物堿毒性，研究配伍減毒使其更好地發(fā)揮藥效作用，通過分析生附子水煎液的電噴霧質譜圖，可以看出生附子中主要的3類生物堿（雙酯型、單酯型和脂類生物堿），以及其他小分子的化合物，然后分別和各種藥材配伍測定驗證，烏頭堿類生物堿在電噴霧條件下形成的離子峰相對強度與其物質的量成正比例關系，電噴霧質譜圖中各離子的相對豐度可以說明對應離子的相對含量變化，來看清雙酯型是否減少，是否有配伍無毒性。甘遂甘草配伍[27]研究水煎液中巨大戟二萜醇型化合物在質譜中離子強度的變化，對萜醇類能更好地檢測。中藥黃芪與當歸配伍采用正離子模式一級掃描，得到特征峰后進行二級串聯(lián)質譜分析，碰撞能量20%～40%，查看異丙酮類的成分變化，質譜譜圖清晰、準確、靈敏度高[28]。閆靜等[29]根據(jù)生物堿類化合物具有較強質子親和勢的特點，利用電噴霧質譜在電噴霧電離條件下極易形成質子化分子，進行馬錢子與甘草的配伍測定，測定出有毒的成分降低。綜上，利用電噴霧質譜技術可以很好地說明中藥的配伍原則。
3.2 現(xiàn)代藥物代謝和藥物動力學
ESI電離特別溫和，成為分析不穩(wěn)定共軛代謝物的適合方法，確定藥物在體內的代謝，以評估藥物的安全性、有效性。ESI電離技術效率高，可以獲得更低的檢測下限，可以用于范圍更大的結構類型。Karthick Vishwanathan
等[30]人運用電噴霧質譜測定人血漿中的莫西沙星，運用洛美沙星做內標，定量限為1ng/mL，能更好地檢測出代謝產(chǎn)物，定量采用正離子模式，因為存在氨基和酮基，很容易質子化，而且檢測時間短，僅用4min，時間短，靈敏度高。李秋莎等[31]應用LC-MS/MS法研究茶多酚在大鼠體內的多組分藥動學，運用負離子模式，特異性很高，分析樣品僅需4min，大大縮短分析時間，LLOQ能達到5ng/mL，檢測靈敏度得以提高。
萬益群等[32]對人體尿液中黃蝶呤與異黃蝶呤進行測定，蝶呤類化合物采用電噴霧質譜起到雙重定性的作用，通過選擇離子來進行定量，能提高靈敏度，2種蝶呤正離子信號較負離子信號相對強的多，經(jīng)實驗證明，黃蝶呤與異黃蝶呤在ESI+模式中全掃描質譜以離子峰[M+H]+穩(wěn)定存在，采用健康人和癌癥的尿液，分別進行定量分析，方法快捷、準確。
ESI離子源能電離80%～90% 的化合物，屬于通用型離子源，適用于多組分篩選[33]。沈保華等[34]用電噴霧質譜對血液及尿液中及其代謝物的篩選及確證，采用正離子電噴霧，測定56種化合物絕大部分最低檢測限小于0.1ng/mL，建立包含及其代謝物共61種化合物的精確相對分子質量數(shù)據(jù)庫分析方法，Jun Qian等測定紫杉醇在人血漿中的藥代動力學，0.3mL血漿，定量下限為1ng/mL。
馬海英等[35]檢測糞中黃山藥總皂苷及其代謝產(chǎn)物。整體給予大鼠灌服黃山藥總皂苷于給藥后不同時間，采集尿及血清樣品，用ESI- MS檢測吸收入血成分，測定時選擇負離子方式檢測，先用全掃描一級質譜方式獲得待測物的準分子離子峰[M- H]–，離子源溫度為120℃，然后用ESI- MSn離子阱技術對準分子離子峰及其碎片離子峰進行多級質譜分析，獲得相應的子離子質譜圖。
高博彥等[36]測定復方酸棗仁湯的血漿代謝情況，在負離子模式下，僅進樣10μL，在60min內，梯度洗脫，5%～90%乙腈溶液，檢測到各色譜峰在負離子模式下的分子離子峰[M-H]–、[M+Cl]–，由分子峰測定可能的分子量，推斷一定的結果，對比原有成分和人血吸收成分，有些許不同，含皂苷類的物質如酸棗仁，一般以原型或者苷元形式存在，一些含揮發(fā)油的物質入血較少。
周麗君等[37]測定注射用艾普拉唑鈉用丁螺環(huán)酮作為內標，用比格犬做實驗，最低濃度可以達到5μg/L，且在5min內出峰，采用電噴霧質譜簡單快捷，特異性好，進行血藥濃度的測定，與劑量呈線性。
陳永婧等[38]利用高分辨電噴霧四級桿飛行時間質譜，正離子掃描模式對膀胱癌血清和尿液代謝組學進行研究，對潛在的標志物進行篩選、鑒定，對代謝產(chǎn)物進行分析，對于電噴霧質譜而言非常快捷、方便。楊杰等[39]研究小柴胡湯對抑郁的影響，收集尿液，收集血液，正負離子同時掃描，看是否能應用于現(xiàn)在流行的抑郁疾病。
3.3 蛋白質方法
電噴霧特點在于可產(chǎn)生大分子化合物（肽，蛋白質）的多電荷離子，根據(jù)不同電荷數(shù)離子的質荷比可準確計算大分子化合物的分子質量和分析復雜生物介質中的樣品，跟傳統(tǒng)的質譜相比，擴大檢測的Mr 范圍，提高靈敏度，根據(jù)馬安德等研究多肽的相對分子量問題，用電噴霧質譜測定蛋白質和多膚的相對分子質量，精確度可達到0.10%～0.01%。遠比精度只有大約5%的聚丙烯酞膝凝膠電泳、凝膠過濾、蔗糖密度離心法等經(jīng)典的蛋白質相對分子質量測定技術更快捷、更精確[40]。它還可與高效液相色譜（HPLC） 和高效毛細管電泳（CE） 等高效的分離方法相連接，結合2種系統(tǒng)分離和高靈敏、高準確度的優(yōu)點，擴大質譜在生物領域的應用[7]。
電噴霧質譜對于鑒定凝膠電泳所分離的蛋白質提供有力的分析手段，通常途徑是采用雙向電泳的方式，分離出的斑點用胰蛋白酶酶解、提取，再用ESI-MS進行測定。孫明忠等[41]采用雙向膠內差異凝膠電泳檢測2，4-二硝基苯磺酸刺激人角質形成細胞HaCaT反應情況，選取的膠條做質譜分析，膠條的等電點、分子量和質譜分析的等電點、分子量基本吻合，進而繼續(xù)對肽段進行研究。曾嶸等[42]結合雙向電泳，測定膠內人肝癌細胞的蛋白組學，覆蓋率達到72.5%，通過正常的肝細胞和肝癌細胞進行比對。牟芝蓉等檢測維甲酸誘導腫瘤細胞分化有關蛋白質，用毛細管液相色譜和納升電噴霧源串聯(lián)的質譜。所有測定均在正離子方式下進行，經(jīng)檢測質量準確度小于0.1。何曉光[43]采用電噴霧質譜，正離子噴霧模式，篩選鑒定卵巢癌細胞乳源調節(jié)肽，為腫瘤等一系列因素提供治療手段和依據(jù)。郭曄等[44]也用凝膠電泳和電噴霧質譜的方法對兒童急性淋巴細胞白血病的差異細胞蛋白進行分析測定。而對于N端封閉，測序儀不能很好地測序蛋白，電噴霧質譜可以結合軟件更好地完成測序工作。現(xiàn)在更多采用免疫共沉淀方法（CO-IP）結合ESI-MS查看蛋白質之間的相互作用。電噴霧質譜允許在混合蛋白中蛋白質和蛋白質之間的反應，如乳清蛋白[45]，用電噴霧質譜結合有關生化技術可以進行氨基酸序列分析、蛋白質翻譯后修飾的結構推斷等。孫偉等[46]對牛血清蛋白和馬細胞色素C進行優(yōu)化實驗，采用5%～30%的乙腈洗脫梯度，使得胰酶酶切多肽更好地鑒定出來；進行重復性實驗時，主要洗脫峰的保留時間差別不超過1min，表明重復性良好；并研究豐度抑制與高豐度蛋白分子量之間的關系，驗證高豐度蛋白導致豐度抑制多，結合質譜數(shù)據(jù)依賴的鑒定技術，導致高豐度的蛋白重復，低豐度可能檢測不到，檢測結果冗余蛋白較多。
在應用質譜做蛋白組學實驗、鑒定肽實驗的時候，離子帶電荷數(shù)受實驗條件影響，比如說，儀器所使用的電壓，還有溶液的濃度和流速等等。明顯的是，ESI過程中肽的性質會很大程度地影響電荷數(shù)，比如說氨基酸數(shù)目和種類還有肽的形成等，ESI中肽電荷數(shù)量可以擴大質譜儀的檢測極限[47]。
4 展望
醫(yī)藥生物領域迅速發(fā)展，電噴霧質譜的應用會更加發(fā)揮它相應作用。如何保證樣品損失量少和分析速度快、分析量多是發(fā)展方向。為推斷化學合成藥物雜質結構提供有效依據(jù)；為現(xiàn)有藥物含量測定提供標準；對藥物代謝研究痕量成分提供準確定量要求；對于更復雜成分的中藥提供檢測手段，解決一定的分析難點；對基因重組蛋白及蛋白組的研究等，在這些方面，電噴霧質譜有重要理論和實際應用意義[48]。
目前電噴霧質譜的應用還存在一些問題，譬如對于大分子樣品消耗較大，分析時間長，蛋白重復性不好，小分子低豐度蛋白經(jīng)常漏檢等。如何更快、更好地[49]建立高通量的藥物篩選方法、尋找以致病蛋白為靶點的藥物前體分子提供新的手段[50]、建立藥物毒性安全方案等等，以便更好地服務醫(yī)藥行業(yè)是今后需要提升的方面。
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