時(shí)間：2023-05-29 18:25:18
開篇：寫作不僅是一種記錄，更是一種創(chuàng)造，它讓我們能夠捕捉那些稍縱即逝的靈感，將它們永久地定格在紙上。下面是小編精心整理的12篇蜂膠的作用，希望這些內(nèi)容能成為您創(chuàng)作過程中的良師益友，陪伴您不斷探索和進(jìn)步。
1、蜂膠與普通牙膏相比更具有保健牙齒的功效。里面含有的蜂膠成分含有一定的藥理作用。還能夠滋養(yǎng)牙齦，預(yù)防牙齦炎癥的發(fā)生。
2、蜂膠牙膏具有很強(qiáng)的過敏殺菌和清潔牙齒的作用。如果平時(shí)刷牙出血可以防治牙齦出血以及牙齒敏感酸痛的情況。
3、對于平時(shí)口腔腫痛，以及經(jīng)常有口腔潰瘍的人群也特別適用。可以有效的清潔牙齒使口腔變清新。達(dá)到消腫除痛以及預(yù)防口腔潰瘍的發(fā)生。
（來源：文章屋網(wǎng) ）
【摘要】 目的 探討蜂膠黃酮對腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。方法 SD大鼠分為假手術(shù)組、模型組及蜂膠黃酮高、中、低三個(gè)劑量組，大腦中動(dòng)脈栓塞(MCAO)制作模型，檢測各組大鼠腦組織含水量和腦梗死體積，腦組織中超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化物酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)的含量。結(jié)果 與模型組比較，蜂膠黃酮三個(gè)劑量組腦含水量明顯降低(P
【關(guān)鍵詞】 蜂膠黃酮;腦缺血再灌注;自由基
蜂膠乙醇提取物(EEP)可以改善血管的彈性和滲透性，舒張血管、清除血管內(nèi)壁積存物〔1〕，具有抗氧化、清除自由基和對缺血再灌注損傷保護(hù)等作用〔2〕。然而蜂膠黃酮對缺血性腦損傷是否具有保護(hù)作用報(bào)道極少，本研究復(fù)制大鼠缺血再灌注損傷模型，通過腦組織含水量、腦梗死體積和腦組織中超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化物酶(CAT)和丙二醛(MDA)的測定來探討蜂膠黃酮防治腦缺血再灌注損傷的機(jī)制，為腦缺血防治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 材料 SOD、CTA、MDA劑盒均購自南京建成生物制劑研究所，其余試劑均系國產(chǎn)分析純;蜂膠黃酮由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)生物化學(xué)教研室提供。SD大鼠，雌雄各半，體重250～300 g，由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供。
1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 紫外可見分光光度計(jì)(WF2800D3A，北京第二光學(xué)儀器廠)，超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)(JY98Ⅲ，寧波科生儀器廠)，高速冷凍離心機(jī)(D37520型，德國HERAEUS公司)。
1.3 動(dòng)物分組 150只大鼠隨機(jī)分為5組，即假手術(shù)組、模型組、蜂膠黃酮高、中、低劑量組(200、100、50 mg/kg)，每組30只。除假手術(shù)組不插線外，其余4組造模。蜂膠黃酮各劑量組每天灌胃1次，連續(xù)10 d。術(shù)前1 d再給藥1次。
1.4 動(dòng)物模型 根據(jù)Longa等〔3〕的方法制備大鼠缺血再灌注損傷模型。大鼠稱重，6%水合氯醛(350 mg/kg)腹腔麻醉，頸部正中切開，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈。結(jié)扎頸總動(dòng)脈近心端、頸外動(dòng)脈起始端后，在頸總動(dòng)脈處剪 “V”形口，沿頸總動(dòng)脈插入直徑為0.235 mm的標(biāo)記魚線。經(jīng)頸內(nèi)動(dòng)脈向顱內(nèi)插至大腦中動(dòng)脈分叉處，插入深度為18～20 mm，將線與頸內(nèi)動(dòng)脈一起結(jié)扎。術(shù)中維持體溫。再灌注時(shí)外拉線使標(biāo)記端回至頸外動(dòng)脈，拔除插線，結(jié)扎頸外動(dòng)脈。假手術(shù)組不插線外，其余同前。大腦中動(dòng)脈栓塞后2 h恢復(fù)血供，神經(jīng)行為學(xué)評分參照ZeaLonga 5分制標(biāo)準(zhǔn)〔3〕，術(shù)后出現(xiàn)左前肢屈曲，行走時(shí)向左側(cè)轉(zhuǎn)圈即視為造模成功，然后保溫常規(guī)飼養(yǎng)，至24 h斷頭處死取材。
1.5 腦組織含水量的測定 大鼠造模24 h后斷頭取腦，稱量兩側(cè)半腦濕重。再置于烘箱中，100℃烘烤24 h至恒重，稱量干重，計(jì)算含水量。腦組織含水量=(濕重-干重)/濕重×100%。
1.6 腦梗死體積測定 斷頭取腦，將大腦作連續(xù)2 mm冠狀切片，共5片，然后將腦片放入2%TTC磷酸鹽緩沖液中37℃恒溫孵育30 min，正常腦組織染為紅色，梗死灶呈白色。用電子天平稱重著色和未著色部分，計(jì)算腦片中梗死部分的質(zhì)量百分比，以此反映梗死體積比。
1.7 腦組織勻漿SOD、CAT活性、MDA含量檢測 將大鼠立即斷頭取腦，切取缺血側(cè)MCA區(qū)腦組織0.1 g，用0℃生理鹽水制成10%的腦組織勻漿，按SOD、CAT、MDA試劑盒說明書檢測腦組織中SOD、CAT、MDA含量。
1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)均以x±s表示，應(yīng)用SPSS11.5版統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理。各組間比較采用單因素方差分析，成組數(shù)據(jù)比較采用t檢驗(yàn)。
2 結(jié) 果
2.1 腦組織含水量 左腦組織含水量各組間比較無差異，模型組右腦組織含水量明顯高于假手術(shù)組(P
2.2 腦梗死體積 模型組腦組織梗死體積大于假手術(shù)組(P
2.3 腦組織SOD、CAT活力及MDA含量檢測 與假手術(shù)組相比，腦缺血再灌注模型組腦組織MDA含量增加(P
3 討 論
腦組織一定時(shí)間缺血后恢復(fù)血流供應(yīng)，功能不但未見改善相反出現(xiàn)缺血性損傷進(jìn)一步加重的現(xiàn)象稱為腦缺血再灌注損傷。腦缺血再灌注后，引起神經(jīng)細(xì)胞的死亡和凋亡，導(dǎo)致腦組織的損傷和功能障礙。腦缺血早期，內(nèi)皮細(xì)胞間隙緊密連接疏松開放，通透性增高，血腦屏障損害，引起腦組織的潴留和腦水腫。本研究結(jié)果表明蜂膠黃酮有維護(hù)血腦屏障的功能，減輕腦水腫程度，保護(hù)腦缺血損傷。局部腦血流降低的程度和缺血持續(xù)的時(shí)間決定腦缺血損傷的程度。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)蜂膠黃酮治療組梗死區(qū)明顯小于模型組。
再灌注使損傷加重的主要機(jī)制之一是自由基的產(chǎn)生〔4〕。研究表明，在缺血性腦損傷中可產(chǎn)生大量氧自由基(OFR)，而再灌注期間OFR生成加劇〔5〕。OFR損傷細(xì)胞內(nèi)最敏感的靶位就是磷脂膜多價(jià)不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，使神經(jīng)細(xì)胞損傷甚至壞死。尋找有效的自由基清除劑，保護(hù)缺血半暗帶內(nèi)神經(jīng)元免受進(jìn)一步損害及促進(jìn)病變恢復(fù)是實(shí)施腦保護(hù)治療、改善缺血性腦損傷預(yù)后的重要措施之一〔6〕。脂質(zhì)過氧化代謝產(chǎn)物MDA的含量可以反應(yīng)機(jī)體受自由基攻擊的程度。 SOD是體內(nèi)主要自由基清除酶，能夠有效地清除并終止超氧陰離子引發(fā)的連鎖反應(yīng)。CAT 末端氧化酶，其功能是催化細(xì)胞內(nèi)過氧化氫分解，防止膜脂過氧化。MDA顯著升高，說明腦組織缺血后氧自由基脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增強(qiáng);SOD、CAT下降可能是增強(qiáng)的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)消耗了過多的抗氧化酶，氧化抗氧化平衡被打破。大量生成的OFR首先破壞脂質(zhì)生物膜，使細(xì)胞膜對鈉離子及大分子物質(zhì)的通透性增加，神經(jīng)元發(fā)生細(xì)胞毒性水腫和興奮性遞質(zhì)的釋放;線粒體膜受損，能量代謝障礙，并使其內(nèi)部的鈣離子溢出，同時(shí)DNA鏈斷裂，引起染色體的畸變和斷裂，以上共同作用最終使神經(jīng)元死亡。尤其重要的是它可使初始缺血損傷不嚴(yán)重的神經(jīng)元發(fā)生不可逆的壞死，誘導(dǎo)凋亡的發(fā)生。本研究表明蜂膠黃酮可以減輕自由基對腦組織的損傷，機(jī)制可能與其分子中含有酚羥基有關(guān)，該結(jié)構(gòu)可能是清除自由基的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。
總之，蜂膠黃酮可減少腦缺血后腦組織水腫，縮小梗死體積，增加SOD、CAT活性，降低MDA含量，增強(qiáng)對自由基的清除，減輕脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞膜的完整性和穩(wěn)定性。
參考文獻(xiàn)
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新聞回顧
近日，有“免疫軟黃金”之稱的蜂膠被輿論推到了風(fēng)口浪尖。據(jù)中國蜂產(chǎn)品協(xié)會公布的數(shù)字顯示，我國蜂膠每年的產(chǎn)量約300噸，但實(shí)際銷量卻達(dá)到了1000噸，這也就是說，市場上售賣的蜂膠有近七成涉嫌造假。
蜂膠小知識
蜂膠是蜜蜂為了修補(bǔ)蜂巢而分泌的黃褐色或黑褐色的粘性物質(zhì)。
性味歸經(jīng)：性平，味酸、甘，歸肝、脾經(jīng)。
功效：散結(jié)止痛、生肌斂瘡。內(nèi)服可補(bǔ)虛弱、化濁脂、止消渴，治療體虛早衰、高脂血癥、糖尿病等；外用能解毒消腫，治療皮膚皸裂、燒燙傷、雞眼、胼胝、尋常疣等。
用法用量：內(nèi)服時(shí)，每次取1~2克，制成片劑、膠囊或用酒浸液；外用時(shí)，每次取適量，制成酊劑或軟膏涂敷。
以下為1P
修補(bǔ)蜂巢的膠水
蜂膠，其實(shí)是蜜蜂從植物芽孢、樹皮或者樹干上采集的樹脂，再在其中混入其上腭分泌物以及部分蜂蠟加工而成的一種具有芳香氣味的膠狀固體物質(zhì)。蜜蜂將它當(dāng)作膠水，用來修補(bǔ)蜂巢的縫隙或孔洞。蜂巢是蜂群生活和繁殖后代的場所，一個(gè)小小的蜂巢里可能會住著數(shù)萬只蜜蜂，而且里面還儲藏有大量蜂蜜、蜂王漿等營養(yǎng)豐富、容易滋生細(xì)菌的蜂產(chǎn)品，所以蜂巢內(nèi)必須保持無菌的環(huán)境，否則不僅幼蟲、幼蜂及蜂后的生存會受到影響，而且還有可能導(dǎo)致蜂產(chǎn)品失去活性或者變質(zhì)。其次，用來封蓋容易腐爛的物質(zhì)，比如被蜜蜂蜇死的敵害尸體等，以防病菌傳染，從而保持蜂巢的清潔無菌。
奇效佳品
蜂膠集植物分泌物與動(dòng)物分泌物于一體，成分相當(dāng)復(fù)雜。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，其主要成分是黃酮類化合物，此外還含有多種酚類、醇類、酸類、脂類化合物，少量的鐵、鈣、鉻、硅、錳、鉛、錫、鎳、鋁、銅、鉬、鈦、鉀、鋅等微量元素和維生素A、維生素B、多種氨基酸、酶、阿魏酸等，具有很強(qiáng)的抗菌消炎、增強(qiáng)免疫功效、抗衰老以及降血糖、抗腫瘤、促進(jìn)組織再生、防止血管系統(tǒng)疾病、治療胃腸疾病等功效。
1、抗菌消炎 蜂膠中含有大量的黃酮類、萜烯類物質(zhì)，它們對各種細(xì)菌、真菌、病毒等具有顯著的抑制和殺滅作用，能夠用來治療腳氣、濕疹、各種潰瘍、牙周炎、鼻炎、胃炎、泌尿系統(tǒng)感染、痔瘡、腹瀉等疾病。同時(shí)還不會不破壞體內(nèi)的有益菌落。
2、增強(qiáng)免疫力 蜂膠能夠顯著提高機(jī)體的免疫功能和抗病能力，對預(yù)防感冒、衰老以及消除老年斑、色素沉積有很好的療效。
3、抗衰老 機(jī)體的衰老實(shí)質(zhì)是一個(gè)“氧化”的過程，機(jī)體在進(jìn)行新陳代謝的同時(shí)，會不斷產(chǎn)生自由基，而過剩的自由基會作用于血液等脂類物質(zhì)，或者細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)DNA，使細(xì)胞衰老，甚至癌變或死亡等。而蜂膠中的黃酮類、萜烯類物質(zhì)具有很強(qiáng)的抗氧化性能，不但能防止細(xì)胞氧化，還能顯著提高機(jī)體內(nèi)具有清除自由基作用的超氧化物――歧化酶（SOD）的活性。另外，蜂膠中的肉桂酸衍生物和維生素E、C、A以及微量元素硒、鋅等也都有一定的抗氧化作用。這些物質(zhì)相輔相成，共同發(fā)揮抗氧化功能，使蜂膠能有效防止細(xì)胞老化、減少色素形成、排除體內(nèi)毒素等，使人身體強(qiáng)健、容顏煥發(fā)、青春常駐。
4、降低血糖 首先，蜂膠中的黃酮、萜烯類物質(zhì)以及微量元素具有明顯的降低血糖的作用；其次，蜂膠中的黃酮類物質(zhì)、多糖物質(zhì)能夠調(diào)節(jié)機(jī)體代謝；再次，在注射胰島素或服用降糖藥后，蜂膠還可以提高藥效，從而明顯地降低血糖；最后，蜂膠可以減少自由基對細(xì)胞的傷害，防止多種并發(fā)癥。
5、抗腫瘤 蜂膠能夠直接抑制、殺滅癌細(xì)胞，對腫瘤和息有很好的預(yù)防和治療效果。
6、促進(jìn)組織再生 蜂膠可以快速止血，加速傷口的愈合，對創(chuàng)傷、燒傷、燙傷等具有明顯的治療作用。
7、防治血管系統(tǒng)疾病 蜂膠中的黃酮類物質(zhì)，可以活血化瘀、軟化血管、阻止血小板凝聚、改善微循環(huán)，對血管硬化、梗塞、血栓、高血脂等都有很好的預(yù)防和治療效果。
8、治療胃腸疾病 蜂膠能夠在胃腸粘膜上形成一層酸不能滲透的薄膜。這層薄膜作用于十二腸潰瘍，既能殺菌抗炎，又能保護(hù)和促進(jìn)受損組織更新，同時(shí)還能促使?jié)儾糠萦稀?/p>
此外，蜂膠還具有明顯的安神、消炎、止痛、止癢、麻醉、抗輻射等作用。
以下為2P
來源不同，功效各異
蜂膠、蜂蜜與蜂王漿的來源各不相同，功效也不大相同。蜂膠的原料是膠源植物的分泌物――樹脂類物質(zhì)，所以蜂膠的主要成分是黃酮類化合物，具有抗菌、消炎、抗氧化、增強(qiáng)免疫力等功效。
蜂蜜的原料源于花源植物的蜜汁或者昆蟲分泌的蜜露，所以蜂蜜的主要成分是葡萄糖和果糖。李時(shí)珍在《本草綱目》中說：“蜂蜜益氣補(bǔ)中，止痛解毒，除百病，和百藥，久服強(qiáng)志輕身，不老延年。”
而蜂王漿則是工蜂咽下腺分泌的一種以氨基酸、蛋白質(zhì)、王漿酸為主要成分的超級營養(yǎng)物質(zhì)，它主要是由負(fù)責(zé)撫育幼蜂、照顧蜂王的工蜂通過食用蜂花粉、蜂蜜而進(jìn)行分泌轉(zhuǎn)換而成。蜂王由于長期食用蜂王漿，壽命可達(dá)到5~6年，而蜜蜂的一般壽命只有1~2個(gè)月。蜂王漿延年益壽的功效可見一斑。
因此，蜂膠是蜜蜂的藥品，而蜂蜜、蜂王漿則是蜜蜂的食物，其中蜂王漿更是蜂王賴以形成和終生的食物。
兩招辨真假
真品蜂膠是不透明的膠狀固體，呈黃褐色或黑褐色，具有芳香氣味，吃起來味道略苦，還帶有少許辛辣味；它不溶于水，卻能溶于酒精中。真假蜂膠可以用以下幾個(gè)方法來鑒別：
一嘗味道：如果蜂膠味道苦且略帶辛辣味，那表明這是真品。如果味道發(fā)咸，則可能是加了醬油；如果發(fā)甜，則可能是加了蜜或糖，這兩種味道的蜂膠都是偽品。
二滴水試真假：在杯子里倒上少許溫白開水，把蜂膠液滴在水里。如果蜂膠馬上沉到杯底，且不散開，同時(shí)水面浮起一層薄薄的白色乳狀物，攪動(dòng)后變成白色混濁狀的，說明這是真品；如果攪動(dòng)后不變色的，那表明是偽品。把水倒掉，如果杯底有蜂膠殘留物，用水不易洗掉，用酒一擦就掉的，表明是真品；如果杯底沒有殘留物的，則為偽品。
服食有計(jì)較
蜂膠是一種天然的抗生素，它是保健品不是藥品，所以大家可以放心食用。平時(shí)，我們常見的吃法有這么幾種：
1、對于濕性的蜂膠，比如蜂膠液，可以滴在饅頭等主食上，與主食一起吃。
2、對于膠囊的蜂膠，比如蜂膠軟膠囊，最好早晚空腹各吃一粒（或兩粒），用溫水送下。這是因?yàn)樵绮颓鞍雮€(gè)小時(shí)空腹服用蜂膠，可以迅速調(diào)動(dòng)免疫系統(tǒng)功能，清除昨晚積蓄的毒素；晚上睡覺之前服用蜂膠，可以清除白天身體受到的污染。
3、如果想要改善蜂膠的口味，可以把蜂膠加在牛奶、咖啡、蜂蜜等飲品中一同服用。這樣既能改善口味，又能避免蜂膠的粘壁現(xiàn)象。
4、服用蜂膠如果想要達(dá)到最佳效果，最好在服食前先在嘴里含一口水，再將蜂膠直接滴入口中和口里的水充分混合。
5、空腹服用蜂膠的效果最佳。但是糖尿病患者在服用蜂膠時(shí)，最好同服用降糖藥一樣，在飯前半小時(shí)服用。
五大禁忌記心中
1、未滿周歲的孩子不可食用。嬰兒的抵抗力較差，如果給嬰兒食用蜂膠可能會影響嬰兒免疫系統(tǒng)正常發(fā)育。
2、對蜂膠有過敏反應(yīng)的人不能食用。研究發(fā)現(xiàn)，蜂膠中含有的原有桂皮酸、桂皮醇、桂皮醛、苯乙烯基桂皮酸鹽和楊芽黃素等都具有致敏性。但是蜂膠的過敏反應(yīng)屬于遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，不像青霉素那樣會有生命危險(xiǎn)，所以人們不必過于擔(dān)心。但是，在服用蜂膠前，最好先做過敏反應(yīng)實(shí)驗(yàn)：在手腕處滴上一滴蜂膠，如果過一天后沒有出現(xiàn)紅腫、不起水泡或無瘙癢感，才能服用蜂膠。
3、孕婦慎服。蜂膠中的某些生物活性物質(zhì)會刺激子宮，如果食用蜂膠不當(dāng)會引起宮縮，干擾胎兒正常的生長發(fā)育。所以不懂得蜂膠食用方法的孕婦最好不要食用蜂膠。
4、不宜與西藥同服。蜂膠與中藥同服，可以幫助中藥發(fā)揮更好的治療作用。但是蜂膠不宜與西藥一起服用，這是因?yàn)榉淠z有加強(qiáng)藥效的作用，如果與毒副作用大的西藥一起服用，會同時(shí)加大西藥的毒副作用。蜂膠最好與西藥分開服用，二者間隔半小時(shí)即可。
5、不宜長期食用。蜂膠的成分十分復(fù)雜，受到加工工藝的限制，蜂膠中普遍存在的重金屬可能難以根除。如果常年服用，同樣可能會對身體造成損害。
藥用小驗(yàn)方
鼻子不通：用棉花棒蘸上蜂膠，涂抹在鼻子里。
牙周病：直接把蜂膠點(diǎn)在患有牙周病的牙齦上，嚴(yán)重時(shí)，可以每2~4小時(shí)點(diǎn)一次。
【關(guān)鍵詞】蜂膠；醇法提取；總黃酮；含量測定
【中圖分類號】R313 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】1004-7484（2012）13-0062-02
蜂膠（propolis）是蜜蜂從植物幼芽與樹干上采集的樹膠與其上顎腺分泌物和蜂蠟等混合加工而成的一種具有芳香氣味的膠狀固體物。它主要由蜂膠香脂、蜂蠟、樹脂、花粉等組成[1]。蜂膠的化學(xué)成份極為復(fù)雜，黃酮類化合物是蜂膠主要的功效成份。蜂膠的化學(xué)成分由蜜蜂采集的膠源植物決定，植物的種類繁多，不同地區(qū)蜂膠中分離出的化學(xué)成分不盡相同[2]，但黃酮類化合物始終是主要成分；目前仍以總黃酮的高低來確定蜂膠的質(zhì)量，藥典中也以兩個(gè)特征性黃酮：白楊素、高良姜素的含量來確定蜂膠的質(zhì)量[3]，黃酮類化合物是蜂膠中發(fā)揮保健營養(yǎng)功能的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。本研究對湖北省神家架林區(qū)產(chǎn)蜂膠的化學(xué)成分進(jìn)行了深入的研究，分離并鑒定了15個(gè)黃酮類化合物，主要為黃酮（醇）和二氫黃酮（醇）類化合物。
1 材料和儀器
蜂膠于2012年5月采自湖北省神家架林區(qū)， 由神農(nóng)架玉泉綠色產(chǎn)品有限公司提供，經(jīng)武漢工業(yè)學(xué)院生物及制藥工程學(xué)院陳平教授鑒定為蜂膠。
XRC-1型顯微熔點(diǎn)測定儀；ZAB-2F型質(zhì)譜儀（英國VG公司）質(zhì)譜儀；Varian Inova 500 MHz核磁共振儀； KQ-500DE型超聲波清洗器（江蘇昆山超聲儀器公司）； RE- 52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮公司）。薄層層析硅膠板和柱層析硅膠均為青島海洋化工廠產(chǎn)品；柱層析用凝膠Sephadex LH-20為Pharmacia（美國） 產(chǎn)品；反相C18色譜填料為Mitsubishi（日本）產(chǎn)品；提取分離時(shí)所用有機(jī)試劑均為分析純，北京北化精細(xì)化學(xué)品公司生產(chǎn)。
2 提取分離及測定
2.1 蜂膠總黃酮的提取【4】 將蜂膠冷凍 5 h后進(jìn)行粉碎，過20目篩，稱取86.51g，加入1升甲醇，潤濕浸泡24小時(shí)，超聲提取30分鐘，抽濾；濾渣再加入1升甲醇，浸泡24小時(shí)，超聲提取30分鐘，抽濾。合并甲醇液，減壓回收甲醇至干；干浸膏粉碎，加入氯仿懸浮浸泡，冷藏24小時(shí)，抽濾去除溶液層，濾渣干燥得紅褐色粉狀（如圖1）提取物30.36g。提限率為35.09%。
2.2 黃酮類化合物的測定 將上述提取物加入少許甲醇完全溶解后，加入硅膠拌樣，進(jìn)行硅膠柱層析分離，以氯仿-甲醇系統(tǒng)梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜分析，合并相似流分，再經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析（氯仿-甲醇及石油醚-乙酸乙酯系統(tǒng)）以及sephadex LH-20、反相C18柱等進(jìn)行純化，得到15個(gè)黃酮類化合物。分類見表1：
3 討論
蜂膠是由蜜蜂將采自植物的枝條、葉芽及愈傷組織等的分泌物與上腭腺、蠟腺等的分泌物同少量花粉混合后所形成的黏性物質(zhì)。蜂膠是一種天然活性物質(zhì)，具有十分廣泛的生物學(xué)作用，成為近年來國內(nèi)保健食品領(lǐng)域研究的一個(gè)熱點(diǎn)。現(xiàn)代研究表明[5]，蜂膠具有抗菌消炎、抗病毒、抗氧化、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫力、軟化血管、調(diào)節(jié)血脂、降血糖、改善微循環(huán)等廣泛的生物學(xué)作用。含有大量的黃酮類、萜烯類化合物是蜂膠的重要特征，蜂膠的大部分生理及藥理功能都與此類化合物有密切關(guān)系。
在2010版藥典對蜂膠的含量測定控制方法為高效液相法控制白楊素及高良姜素的含量；但蜂膠的黃酮化合物類型及含量差異較大，如僅以白楊素及高良姜素等2個(gè)黃酮來控制質(zhì)量，不能代表蜂膠中黃酮的整體組成及保健作用。本次課題以蜂膠的湖北神農(nóng)架林區(qū)產(chǎn)蜂膠為實(shí)驗(yàn)對象，研究其主要黃酮類化合物的組成，并準(zhǔn)備在后續(xù)的試驗(yàn)中測定相應(yīng)黃酮的含量及其降血糖、調(diào)節(jié)血脂、抗衰老等功能作用，為深入研究和合理開發(fā)鄂產(chǎn)蜂膠的功能產(chǎn)品提供質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、技術(shù)路徑和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
參考文獻(xiàn)
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作者簡介：
周威（1973-），男，湖北武漢人，副教授，主要從事天然藥物化學(xué)成分研究。
基金項(xiàng)目：
武漢市科技攻關(guān)項(xiàng)目（編號：201220822276）
目的 研究蜂膠提取物對不同齲敏感者口腔變形鏈球菌臨床分離株的產(chǎn)酸能力的影響。方法 以BHI液體培養(yǎng)基為溶劑，分別配制pH=7.0的5 g/L 和1.25g/L水溶性蜂膠溶液，1.5625 g/L醇溶性蜂膠溶液，并以空白液體培養(yǎng)基作為對照，加入高齲組，無齲組，國際標(biāo)準(zhǔn)株變形鏈球菌，厭氧培養(yǎng)48 h 后離心，用精密酸度儀測定上清的pH值，計(jì)算出pH，并進(jìn)行比較。結(jié)果 高齲組和國際標(biāo)準(zhǔn)株產(chǎn)酸能力明顯高于無齲組；醇溶性蜂膠溶液和水溶性蜂膠溶液皆可使變鏈菌產(chǎn)酸能力降低，蜂膠各組與對照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.05) 。醇溶性蜂膠溶液和5 g/L 水溶性蜂膠溶液降低產(chǎn)酸能力的作用比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)，但是均明顯高于1.25g/L水溶性蜂膠溶液；蜂膠對高齲組和無齲組細(xì)菌的影響沒有顯著性差異。結(jié)論 蜂膠提取物影響變形鏈球菌的代謝，使變形鏈球菌產(chǎn)酸能力降低。
【關(guān)鍵詞】 蜂膠; 變形鏈球菌; 齲敏感；產(chǎn)酸
ABSTRACT
Objective To study the effect of propolis on acid producing ability of clinical isolates from strptococcus mutans of the patients with difference caries susceptibility. Methodss Strptococcus mutans from caries-active group，caries-free group and international standard strain group were put into BHI culture medium with 5g/L and 1.25g/L proplis extract in water，into BHI with 1.5625g/L proplis extract in ethanol and into BHI culture medium which was taken as the control; after anaerobic culture for 48 hours，centrifugation was made，the pH value of supermatant in each solution was detected with acurate acidity tester and pH was calculated; the results were compared. Results Acidogenencity of caires-active group and of international standard strain group was much higher than that of caries-free group; proplis extract in water or in ethanol decreased the acidogenecity of streptococcus mutans; the comparison of each group with proplis to the control was of statistical significance (P＜0.05); the effect comparison between the solution with proplis extract in ethanol and the solution with 5g/L proplis extract in water in decreasing acidogenecity was of no statstical significance while their effects in decreasing acidogenecity were obiously stronger than that of the solution with 1.25g/L proplis extrat in water; the effect of proplis in caries-active group was without significant difference from that in caries-free group. Conclusions Proplis extract can affect the metabolism of streptococcus mutans and decrease its acidogenecity.
KEYWORDS proplis streptococcus mutans caries susceptibility
acidogenecity
齲病是世界范圍內(nèi)的常見病和多發(fā)病，其發(fā)病率高，危害性大，被世界衛(wèi)生組織列為要重點(diǎn)防治的三大疾病之一［1］。變形鏈球菌（變鏈菌）是公認(rèn)的主要致齲菌之一。近年來對蜂膠的研究比較多，本實(shí)驗(yàn)通過觀察蜂膠對不同齲敏感患者口腔變形鏈球菌臨床分離株產(chǎn)酸的影響，從而探討蜂膠作為一種生物防齲制劑的可行性，為其臨床使用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
1 材料和方法
1.1 材料 蜂膠：樂山錫誠集團(tuán)提供。細(xì)菌: 自行分離、鑒定自不同齲敏感患者口腔中的變形鏈球菌63株，其中高齲組34株，無齲組29株（高齲者dmft≥6，無齲者dmft＝0）。
國際參考菌株變形鏈球菌（S．mutans）ATCC 25175（血清型C），由四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)院口腔生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供。
1.2 菌液的制備 將甘油保種變形鏈球菌臨床分離株與國際標(biāo)準(zhǔn)株分別接種于MS固體培養(yǎng)基，37℃，微需氧復(fù)蘇48h，檢查生長狀況，鏡檢鑒定無污染后，挑取單個(gè)菌落轉(zhuǎn)種于BHI 液體培養(yǎng)基增菌，厭氧（80%N2、10%H2、10%CO2）培養(yǎng)24h，涂片檢查為純培養(yǎng)后，將菌液在4℃下以3000r／min離心15min，棄上清，收集細(xì)菌，無菌生理鹽水洗菌兩次，用無菌生理鹽水調(diào)整為于紫外分光光度計(jì)540 nm處吸光度A=1.0的菌懸液，備用。
1. 3 試劑的制備 以pH為7.0的BHI 培養(yǎng)基為溶劑，配制醇溶性蜂膠溶液(1.5625g/L)，水溶性蜂膠溶液(5g/L 和1.25g/L)，調(diào)定各培養(yǎng)基的pH值為7.0 。
1. 4 實(shí)驗(yàn)方法 實(shí)驗(yàn)為4組：5 g/L蜂膠水溶液組，1.25 g/L蜂膠水溶液組，1.5625 g/L蜂膠醇溶液組，BHI培養(yǎng)液組做為對照。取各菌株的菌懸液，按菌液與液體培養(yǎng)基1∶10 (v/v) 比例接種細(xì)菌，37℃厭氧培養(yǎng)（80%N2、10%H2、10%CO2）48 h， 3000rpm，離心15 min，收集上清，采用 pHS - 3C精密酸度計(jì)，測定培養(yǎng)物上清的終末pH 值，并計(jì)算pH的變化值pH值（初始pH 值－終末pH 值）。
1. 5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件中的two-way ANVOA對不同細(xì)菌的產(chǎn)酸能力即pH值，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析(а=0.05)；并采用kendall相關(guān)分析法檢測蜂膠與細(xì)菌產(chǎn)酸能力之間的相關(guān)性。
2 結(jié)果
蜂膠對變鏈菌產(chǎn)酸能力的影響結(jié)果見表1。
細(xì)菌F=65.832，P＜0.05，培養(yǎng)基F=98.01，P＜0.05，細(xì)菌與培養(yǎng)基的交互性F=1.192，P＞0.05。
表1 在各組培養(yǎng)基中不同齲敏感患者變形鏈球菌的產(chǎn)酸能力（略）
統(tǒng)計(jì)分析得出：無論添加蜂膠與否，國際標(biāo)準(zhǔn)株和高齲組變鏈菌的產(chǎn)酸能力沒有顯著性差異，但是它們的產(chǎn)酸能力均高于無齲組變鏈菌的產(chǎn)酸能力(P
采用kendall相關(guān)分析法得出：kendall等級相關(guān)系數(shù)為-1.0，P值為0.042＜0.05，說明蜂膠與變鏈菌的產(chǎn)酸能力成負(fù)相關(guān)。因此可以可以得出蜂膠可以抑制變鏈菌的產(chǎn)酸能力。
3 討論
蜂膠是一種天然活性物質(zhì)，具有十分廣泛的生物學(xué)作用，成為近年來國內(nèi)藥理學(xué)領(lǐng)域研究的一個(gè)熱點(diǎn)。蜂膠中含有大量黃酮類、芳香酸、脂肪酸及萜烯類化合物，具有廣譜抗菌作用。實(shí)驗(yàn)表明，蜂膠對革蘭陽性細(xì)菌的抗菌作用較革蘭陰性細(xì)菌為強(qiáng)［2］。
變形鏈球菌是一種革蘭氏陽性兼性厭氧菌，它能產(chǎn)生有機(jī)酸，使牙體硬組織發(fā)生無機(jī)物的酸蝕脫礦，有機(jī)物崩解，最終導(dǎo)致齲病的發(fā)生［3］。對于蜂膠的防齲作用已有一些報(bào)道。Koo 等［4］報(bào)道蜂膠醇溶液對口腔中10種細(xì)菌皆有抑菌作用，特別提出蜂膠醇溶液對變形鏈球菌和遠(yuǎn)緣鏈球菌的抑菌作用很強(qiáng)；王晶等［5］研究得出醇溶性蜂膠溶液和水溶性蜂膠溶液都可以使變形鏈球菌產(chǎn)生的乳酸量顯著減少。
本實(shí)驗(yàn)得出蜂膠醇溶液和水溶液均可以使變形鏈球菌的產(chǎn)酸能力降低，這與參考文獻(xiàn)中的結(jié)果一致。高齲組細(xì)菌產(chǎn)酸能力高于無齲組的細(xì)菌，可能是因?yàn)楦啐x組存在著產(chǎn)酸能力強(qiáng)的菌株。但是蜂膠對于高齲組和無齲組的細(xì)菌的影響沒有顯著性差異，這說明蜂膠對不同菌株產(chǎn)酸作用的抑制機(jī)制可能都是一致的。蜂膠做為一種生物防齲材料，是具有可行性的，但是蜂膠的化學(xué)成分隨產(chǎn)地和蜜蜂種類不同而異，具有高度的復(fù)雜性和多樣性，對于蜂膠抑制變鏈菌產(chǎn)酸的具體機(jī)制、蜂膠的其他防齲性能以及不同蜂膠之間防齲能力的差異性，還需要進(jìn)一步研究。
參考文獻(xiàn)
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近些年，在世界各國掀起回歸自然的熱潮中，蜂產(chǎn)品備受人們的推崇。在歐洲、美國、日本等經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)國家和地區(qū)，對蜂產(chǎn)品的需求量日益增加，因?yàn)榭茖W(xué)使用蜂產(chǎn)品在保健養(yǎng)生、防病治病方面的作用日漸突出。例如在日本，蜂產(chǎn)品的消費(fèi)量增加了3倍以上，被認(rèn)為是日本人均壽命延長的六大原因之一。我國利用蜂產(chǎn)品健身、治病的歷史可追溯到兩千年之前。明代李時(shí)珍在《本草綱目》中記述：“蜂蜜其入藥之功有五：清熱也、補(bǔ)中也、解毒也、止痛也、潤燥也……與甘草同功。”傳統(tǒng)的中成藥“煉蜜為丸”，用的就是優(yōu)質(zhì)的蜂蜜。古往今來，蜂蜜和中醫(yī)、中藥結(jié)下了不解之緣。
目前使用較多的蜂產(chǎn)品一般可分為四大類：蜂蜜類、蜂王漿類、蜂花粉類和蜂膠類。另外，蜂產(chǎn)品還包括蜂蠟、蜂毒、蜂蛹、蜂幼蟲等。本刊曾介紹了蜂王漿的有關(guān)知識，下面再談?wù)劮淠z和蜂花粉的保健功效。
蜂膠是蜜蜂采集樹芽、樹干上的樹膠與其上顎腺分泌物和蠟腺分泌的蠟質(zhì)調(diào)制而成的具有芳香性、不透明的膠狀固體。蜜蜂把蜂膠涂抹在蜂箱的所有角落和表面部位，使蜜蜂幼蟲能在蜂箱里正常生長發(fā)育。另外，蜂膠可使?fàn)I養(yǎng)極為豐富的蜂王漿、蜂花粉、蜂蜜等在蜂箱內(nèi)保存較長時(shí)間而不腐敗變質(zhì)。由于有了蜂膠，使得蜜蜂在漫長的歲月和嚴(yán)酷的生存環(huán)境中得以生息繁衍，所以人們稱蜂膠是蜜蜂王國的保護(hù)神。
蜂膠的防腐作用引起了科學(xué)家的興趣。研究發(fā)現(xiàn)，蜂膠的成分十分復(fù)雜，目前已知的有300多種有效物質(zhì)，包括黃酮類、萜（音“貼”）類、芳香類等化合物以及多種酶和氨基酸、維生素等等。科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)，蜂膠對細(xì)菌、真菌、霉菌和病毒有較強(qiáng)的殺滅作用，是一種不可多得的天然廣譜抗菌物質(zhì)，又是一種理想的抗氧化劑和免疫增強(qiáng)劑，具有很高的藥用保健價(jià)值。
蜂膠中的黃酮類化合物具有很強(qiáng)的抗氧化作用，能軟化血管，防治動(dòng)脈硬化，還有降血脂、降膽固醇等作用，對心腦血管疾病患者有明顯的保健功效。蜂膠中的多種活性酶和萜類物質(zhì)可增強(qiáng)正常細(xì)胞膜活性，預(yù)防細(xì)胞癌變或癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移。接受手術(shù)或放、化療的患者服用蜂膠后，可增強(qiáng)機(jī)體抵抗力，還可有效防止放射性粘膜炎的發(fā)生與發(fā)展，減少放、化療的副作用。人們無意中發(fā)現(xiàn)，世界各地的養(yǎng)蜂人很少患癌癥，這也從一個(gè)側(cè)面證明了蜂膠等蜂產(chǎn)品的抗癌作用。
在現(xiàn)代文明社會，糖尿病成為威脅中老年人健康的常見病、多發(fā)病。研究發(fā)現(xiàn)，蜂膠含有的多種生物活性物質(zhì)有促進(jìn)胰腺功能、增強(qiáng)分解利用葡萄糖而達(dá)到降低血糖的效果。有報(bào)道認(rèn)為，糖尿病患者在治療過程中堅(jiān)持服用蜂膠，可有效延緩糖尿病的進(jìn)程及并發(fā)癥的發(fā)生。還有研究發(fā)現(xiàn)，蜂膠對慢性腸胃炎患者有療效。蜂膠具有良好的成膜性，能夠在粘膜上形成一層保護(hù)膜，從而對胃及十二指腸潰瘍有治療作用。蜂膠還對多種皮膚病有療效，具有抗菌消炎、局部止血止痛等作用，能促使上皮組織增生和肉芽生長,改善皮下組織血液循環(huán)，限制疤痕形成。蜂膠還可營養(yǎng)皮膚，保護(hù)皮膚不受酸堿等化學(xué)物質(zhì)傷害，具有護(hù)膚美容的效果。
與其他類型的蜂產(chǎn)品比較，蜂膠的作用側(cè)重于藥效方面。蜂膠的劑型可分為膠囊類（有軟膠囊和硬膠囊兩種）、蜂膠液（分酒溶和水溶兩種）、片劑以及外用劑型，請按照說明書標(biāo)明的劑量和方法服用。需要注意的是，某些人對蜂膠會發(fā)生過敏反應(yīng)，一般在服用3～5天內(nèi)發(fā)生，停用后1～2周癥狀會消失。
蜂花粉是蜜蜂從植物花朵中采集的花粉粒，是工蜂的食物，故又稱為“蜂糧”。蜂花粉中除含有優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)等豐富的營養(yǎng)素外，還含有豐富的生物活性酶等多種有效成分，包括了孕育生命所需的營養(yǎng)物質(zhì)，被營養(yǎng)學(xué)家和醫(yī)學(xué)家譽(yù)為“純天然的濃縮營養(yǎng)庫”。
蜂花粉又是一種“可以吃的化妝品”，內(nèi)服、外用均有利于美容。長期服用蜂花粉可調(diào)節(jié)人體營養(yǎng)平衡，使細(xì)胞的生理代謝處于良好狀態(tài)。也可通過皮膚直接吸收蜂花粉中的營養(yǎng)成分，達(dá)到營養(yǎng)肌膚的美容效果。
現(xiàn)代研究認(rèn)為，蜂花粉中含有的多種生物活性物質(zhì)能夠增強(qiáng)人體中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能，使大腦保持旺盛的活力，能夠增強(qiáng)體力、抗疲勞、抗衰老。還有報(bào)道認(rèn)為，蜂花粉能夠輔助治療前列腺疾病。
蜂花粉可在早飯、晚飯后半小時(shí)用溫開水送服，每次5克。對花粉過敏者不可服用蜂花粉。
【關(guān)鍵詞】蜂膠；西洋參；調(diào)節(jié)免疫；抗腫瘤
蜂膠在我國市場出現(xiàn)只有40多年歷史，這是由于中華蜂不產(chǎn)蜂膠，所以從意大利蜂引進(jìn)我國才產(chǎn)蜂膠。蜂膠在2005年作為中藥材收錄中國藥典，目前國內(nèi)產(chǎn)品多以單純蜂膠制成的保健品為主，將蜂膠與西洋參配伍進(jìn)行產(chǎn)品研發(fā)報(bào)導(dǎo)很少，本文將蜂膠、蜂膠西洋參組合物灌胃肝癌移植瘤小鼠，并采用血清溶血素測定、NK細(xì)胞活性測定、ConA誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能測定和腫瘤抑制率測定，觀察其對免疫功能的影響及抗腫瘤作用，期望為蜂膠配伍西洋參的產(chǎn)品研發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下：
1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和檢測條件
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用ICR種小鼠由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，清潔級，雌性，體重20±2g。飼料由浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)GB14924-1994。檢測環(huán)境條件：溫度91-93℃，相對濕度60-65%。動(dòng)物于試驗(yàn)前在動(dòng)物房環(huán)境中適應(yīng)3天
2實(shí)驗(yàn)藥物和劑量設(shè)計(jì)
2.1 蜂膠:采自養(yǎng)蜂場的原蜂，由杭州天廚蜜源保健品有限公司提供。將蜂膠經(jīng)乙醇提純，經(jīng)冷凍干燥制成純蜂膠。純蜂膠與淀粉按2：1混合，加入粉碎機(jī)中打成200目蜂膠粉，冷貯備用。
2.2 西洋參：購自吉林省宏久生物科技股份有限公司的西洋參提取物。
2.3 受試藥的配制：將蜂膠粉與西洋參提取物以3：1的比例混合均勻，臨用時(shí)用蒸餾水配制成5g/ml、2.5g/ml、1.25g/ml濃度。蜂膠對照組采用蜂膠粉，臨用時(shí)用蒸餾水配制成5g/ml濃度。
2.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)三個(gè)蜂膠西洋參劑量組、一個(gè)蜂膠對照組和一個(gè)蒸餾水對照組。低、中、高三個(gè)蜂膠西洋參組劑量分別為0.5、1.0、2.0g/kg體重(相當(dāng)于人體臨床擬用量的7.5、15和30倍)，蜂膠對照組劑量為蜂膠粉2.0g/kg體重，蒸餾水對照組每日灌胃蒸餾水20ml/kg體重。給藥前24小時(shí)以上各組動(dòng)物均皮下接種HepA細(xì)胞(2×107/ml)0.2ml/只。
3實(shí)驗(yàn)方法
3.1小鼠血清溶血素測定(血凝法)：各組灌胃給樣品，每天1次，連續(xù)10天。在試驗(yàn)第6天，每鼠腹腔注射0.2ml2%(V/V)壓積綿羊紅細(xì)胞(SRBC)懸液，進(jìn)行免疫。4天后，取血離心，收集血清，用生理鹽水將血清倍比稀釋，37℃溫箱孵育3小時(shí)，觀察血球凝集程度，計(jì)算抗體積數(shù)。
3.2 NK細(xì)胞活性測定（LDH測定法)：各組灌胃給樣品，每天1次，連續(xù)10天。在試驗(yàn)第11天，每鼠無菌取脾，置于盛有適量無菌Hanks液的小平皿中，在200目尼龍網(wǎng)袋內(nèi)輕輕捻壓，過濾，制成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)，用RPMI1640完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為5×±1O6個(gè)/ml。試驗(yàn)前24小時(shí)將YAC-l細(xì)胞(靶細(xì)胞)傳代培養(yǎng)，應(yīng)用前用Hanks液洗3次，用RPMI1640完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為l×lO5個(gè)/ml。取靶細(xì)胞和脾細(xì)胞懸液(效應(yīng)細(xì)胞)各1OOul(效靶比50：1)，加入U(xiǎn)型96孔培養(yǎng)板中，靶細(xì)胞自然釋放孔加靶細(xì)胞和培養(yǎng)液各10Oul，靶細(xì)胞最大釋放孔加靶細(xì)胞和l%NP40各1Ooul。上述各項(xiàng)均設(shè)三個(gè)復(fù)孔，于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時(shí)，離心，每孔吸取上清1OOul置平底96孔培養(yǎng)板中，同時(shí)加入LDH基質(zhì)液100μl，反應(yīng)3分鐘，每孔加入1mol/L的HCI30ul，測光密度(OD)值，計(jì)算NK細(xì)胞活性。
3.3 ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的測定：各組灌胃給樣品，每天1次，連續(xù)10天。動(dòng)物頸椎脫臼處死，取脾臟，在200目尼龍網(wǎng)袋內(nèi)輕輕捻壓，過濾，制成脾細(xì)胞懸液，用無菌Hanks液洗2次，用RPMI1640完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為1×107個(gè)/ml，將細(xì)胞懸液加入96孔培養(yǎng)板中，每一份脾細(xì)胞懸液3孔，每孔0.1ml，每孔再加入含ConA（濃度10ug/ml）的RPMI1640完全培養(yǎng)液0.1ml。培養(yǎng)板置5%CO2，37℃培養(yǎng)72h。培養(yǎng)結(jié)束前16h，每孔加入3H-TdR20μl，使其終濃度為3.7×104Bq/ml。用多頭細(xì)胞收集器收集細(xì)胞于玻璃纖維濾紙上。濾紙片置閃爍液中，用液閃儀測定每分鐘脈沖數(shù)（cpm)。結(jié)果用三個(gè)復(fù)孔的平均cpm表示。
3.4 剝離各動(dòng)物實(shí)體瘤，稱重，計(jì)算抑瘤率%。
抑瘤率=( 1-給藥組平均瘤重/對照組平均瘤重)×100%
3.5數(shù)據(jù)處理：采用方差分析。
4實(shí)驗(yàn)結(jié)果
4.1 對小鼠血清溶血素影響：結(jié)果見表1。與陰性對照組(蒸餾水)比較，蜂膠西洋參中、高二個(gè)劑量組能提高小鼠血清溶血素抗體積數(shù)水平，差異均有顯著性(P
表1 對荷瘤小鼠血清溶血素影響
注：* P
4.2對小鼠NK細(xì)胞活性的影響：結(jié)果見表2。與陰性對照組(蒸餾水)比較，蜂膠西洋參中、高二個(gè)劑量組均能提高小鼠NK細(xì)胞活性，差異均有顯著性(P
表2 對小鼠NK細(xì)胞活性的影響
注：* P
4.3 對ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響：結(jié)果見表7。蜂膠西洋參中、高劑量組及蜂膠對照組的ConA誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化值，與陰性對照組(蒸餾水)比較，差異均有顯著性(P
表3對ConA誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響
注：* P
4.4 對肝癌移植瘤(HepA)的抑制作用：結(jié)果見表7。蜂膠及蜂膠西洋參各組對HepA腫瘤的抑制率在10%～18%，但與陰性對照組比較無明顯差異（P＞O.05）。
表4 對HepA荷瘤小鼠瘤體生長的影響
注：與陰性對照組比較無明顯差異（P＞O.05）
5討論
蜂膠是蜜蜂從植物芽孢或樹干上采集的樹脂，混入自身分泌物形成的一種膠狀物質(zhì)，具有多種保健功能，目前社會上也有人與西洋參一起配伍用來滋補(bǔ)身體。文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)蜂膠能夠增強(qiáng)免疫功能低下小鼠的抗體生成細(xì)胞功能，提高溶血素含量，增強(qiáng)單核吞噬細(xì)胞功能，提示蜂膠有促進(jìn)和調(diào)節(jié)機(jī)體體液免疫功能的作用，并增加機(jī)體吞噬細(xì)胞的吞噬作用[1]。也有作者用MTT法、耳腫脹法、Jerne改良玻片法、血凝法、半體內(nèi)法、乳酸脫氫酶測定法等多種方法，觀察蜂膠提取物對小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、血清溶血素、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞、NK細(xì)胞活性狀況，結(jié)果蜂膠提取物具有增強(qiáng)小鼠細(xì)胞免疫功能和體液免疫功能的作用[2]。西洋參主要具補(bǔ)氣養(yǎng)陰，清熱生津功能[4]。現(xiàn)代藥理研究表明具有抗應(yīng)激，抗休克和改善心血管系徑統(tǒng)作用有抗應(yīng)激[5]。蜂膠與西洋參配伍進(jìn)行免疫功能觀察報(bào)導(dǎo)甚少。本文將蜂膠與西洋參配伍成混合粉進(jìn)行對荷瘤小鼠免疫功能影響的觀察，結(jié)果表明蜂膠西洋參以1.0g/kg和2.0g/kg 灌胃荷瘤小鼠可明顯提高小鼠的血清溶血素水平（P
參考文獻(xiàn)
[1]于曉紅,李淑華,李樹偉,等.蜂膠對小鼠免疫功能影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].中醫(yī)藥信息,2001,18（4）:53-54。
[2]邵艷,浦錦寶.蜂膠調(diào)節(jié)小鼠免疫功能實(shí)驗(yàn)研究[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志,2005,15（2）:90-92。
[3]王艷宏,劉中申,關(guān)楓,等.西洋參及其制劑的免疫調(diào)節(jié)作用研究[J].中醫(yī)藥學(xué)刊,2004,22(3):566-567。
本實(shí)驗(yàn)采用1,1-二苯基苦基苯肼自由基(DPPH)分光光度法[3,4]測定蜂膠、BHT、蜂膠抗氧化美容霜和市售抗氧化霜的抗氧化活性。進(jìn)一步證實(shí)了蜂膠的抗氧化活性,為蜂膠添加入化妝品中的可行性和優(yōu)越性奠定基礎(chǔ)。
1材料與儀器
材料:蜂膠1,由湖北荊門蜂農(nóng)提供;蜂膠2,由福建省神蜂科技開發(fā)有限公司提供;市售抗氧化霜;BHT(化學(xué)純)由國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;DPPH自由基,購于光純藥工業(yè)株式會社;其它試劑皆為國產(chǎn)AR級,試驗(yàn)用水皆為二次重蒸水。
儀器:WFJ 7200型分光光度計(jì),尤尼柯(上海)儀器有限公司;電子天平BS223S,賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司;自動(dòng)雙蒸純水器、水浴鍋、電熱鼓風(fēng)干燥箱等。
2實(shí)驗(yàn)方法
2.1 兩種蜂膠清除DPPH?自由基能力的比較
蜂膠1、蜂膠2用無水乙醇配置成濃度為0.008g/mL的溶液(參照2009年蜂膠國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 24283-2009);
DPPH溶液:稱取0.0128g加無水乙醇溶解于50mL容量瓶中,定容,搖勻 ,作為儲備液 ( 6. 5×10- 4 mol/ L ) 保存于冰箱中,用時(shí)稀釋10倍;
樣品在40℃,75%RH下放置0~4周后,按表1加樣并充分混勻,測定30min后其在517nm波長處的吸光值。取3次測試的平均值計(jì)算清除率。
空白A0為4.0mL DPPH溶液加0.2mL樣品溶劑,樣品Ai為4.0mL DPPH溶液加0.2mL樣品溶液,測吸光值。
自由基清除率(%)=[(A空白-A末)/A空白]×100%
2.2 兩種蜂膠與BHT清除DPPH?自由基能力的比較
BHT(2,6-二叔丁基對甲酚)用無水乙醇配置成濃度為0.008g/mL的溶液;
蜂膠1、蜂膠2用無水乙醇配置成濃度為0.008g/mL、0.0008g/mL、0.0004g/mL的溶液。樣品在40℃,75%RH下放置0~4周后,同上一步加樣反應(yīng)。
2.3 蜂膠抗氧化美容霜與市售抗氧化產(chǎn)品清除DPPH?自由基能力的比較
在40℃,75%RH下放置0~4周后,直接取蜂膠抗氧化美容霜(添加蜂膠1的終濃度為0.008g/mL)和市售抗氧化霜各0.2mL,按表1,分別加入體系中反應(yīng),并計(jì)算結(jié)果。
2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用spss軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與分析。
3結(jié)果與分析
3.1 蜂膠1與蜂膠2清除DPPH?自由基能力的比較
兩種蜂膠對DPPH?自由基的清除作用見圖1。結(jié)果表明兩種蜂膠對DPPH?自由基皆有明顯的清除作用,其中蜂膠1的自由基清除活性略大于蜂膠2。隨著在40℃,75%RH下放置時(shí)間的延長,兩種蜂膠的清除活性無明顯改變,并都明顯大于BHT。
圖1兩種蜂膠的清除率比較
3.2 不同濃度蜂膠與BHT清除DPPH?自由基能力的比較
如圖2、圖3所示,兩種對DPPH?自由基有明顯的清除作用,且清除率與蜂膠的濃度呈正相關(guān)。當(dāng)稀釋20倍后,蜂膠2的自由基清除活性才略低于BHT,而蜂膠1的自由基清除活性與BHT的自由基清除活性差異不明顯。
圖2蜂膠2與BHT的清除率比較
注:蜂膠2*10為蜂膠2溶液稀釋10倍;蜂膠2*20為蜂膠2溶液稀釋20倍。
圖3蜂膠1與BHT的清除率比較
注:蜂膠1*10為蜂膠1溶液稀釋10倍;蜂膠1*20為蜂膠1溶液稀釋20倍。
3.3 蜂膠抗氧化美容霜與市售抗氧化霜清除DPPH?自由基能力的比較
從圖4可以看出,蜂膠抗氧美容霜清除自由基活性強(qiáng),達(dá)到63.71%;在40℃,75%RH下放置1周后,清除率降低到59.90%,而當(dāng)儲存2周后,清除率提升到82.59 %,并保持在該水平;市售抗氧化霜的自由基清除活性為4.84 %,當(dāng)在40℃,75%RH下放置1周后,清除率為3.01 %,放置2周后就不具有自由基清除活性了。
圖4自制蜂膠抗氧化美容霜與市售抗氧化霜的清除率比較
4討論
兩種化妝品的抗氧化活性在40℃,75%RH下放置2周后都有明顯的變化,蜂膠抗氧化美容霜的清除率明顯上升,并保持在較高水平,而市售抗氧化霜的清除自由基能力則完全消失,這可能與它們的乳化狀態(tài)發(fā)生變化有關(guān)。市售抗氧化霜的抗氧化活性很低,可能是因?yàn)樵摦a(chǎn)品價(jià)格低,抗氧化成分含量少,不代表整個(gè)化妝品界,但可以反映出某種社會現(xiàn)象,即化妝品市場的規(guī)范性和真實(shí)性有待進(jìn)一步改善。
本實(shí)驗(yàn)中還存在一些問題:市售霜和蜂膠抗氧化美容霜在DPPH反應(yīng)液中的溶解性不好,一定程度影響結(jié)果。但該問題兩產(chǎn)品同時(shí)存在,也在一定程度上具有可比性。蜂膠還處于初步研究階段,它成分復(fù)雜、藥理活性多樣,各地不同產(chǎn)區(qū)差異性大,其化學(xué)成分的組成和藥理活性的特點(diǎn)常常有很大差別,因此需要更深入的研究。用DPPH法評價(jià)天然抗氧化劑的抗氧化活性,在操作時(shí),一定要注意避光和通風(fēng),因?yàn)?DPPH溶液為劇毒、易揮發(fā)的液體[5]。
隨著市場需求的日益加大,蜂膠的神奇妙效不斷被發(fā)現(xiàn)和證實(shí),我們相信,通過科學(xué)、嚴(yán)格的管理和規(guī)劃,是能夠生產(chǎn)出合格、標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)一的優(yōu)質(zhì)蜂膠化妝品的。
參考文獻(xiàn):
[1] 柳學(xué)松,黃金巖.蜂膠中黃酮類化合物研究及應(yīng)用[J].醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)資訊,2006,4(11): 130-131.
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[3] Fukumoto L R, Mazza G. Assessing Antioxidant and Prooxidant Activities of Phenolic Compounds.Agric Food Chem. 2000, 48:3597-3604.
蜂膠，是蜜蜂采集膠源性植物的樹脂，摻和其上腭腺及蠟腺分泌物，經(jīng)蜜蜂反復(fù)加工而成的膠狀物質(zhì)。蜜蜂將之涂到蜂巢入口和內(nèi)壁上，以保持巢內(nèi)相對無菌狀態(tài)。蜂膠由于產(chǎn)量低且保健功能顯著，被譽(yù)為“紫色黃金”。
“世界蜂膠看巴西。”巴西蜂膠因其產(chǎn)自原始、天然生態(tài)環(huán)境而備受各國消費(fèi)者追捧，中國人也經(jīng)常會托當(dāng)?shù)毓ぷ鞯呐笥奄徺I蜂膠。
綠蜂膠除了蜂膠普遍具有的保健功能外，在抗菌性和提高免疫力方面均優(yōu)于其他品種。因此，出產(chǎn)綠蜂膠的季節(jié)是吉列爾梅和太太妮維雅最忙碌的時(shí)間。他們拉亞集團(tuán)的“蜜蜂家族”系列產(chǎn)品是巴西綠蜂膠知名品牌，多項(xiàng)指標(biāo)居于行業(yè)前列。
記者跟隨吉列爾梅來到米納斯吉拉斯州福米加市附近的叢林中，看到每個(gè)蜂箱里大約有2萬至3萬只蜜蜂。這些蜂箱相當(dāng)于自然界的蜂巢，蜜蜂們在蜂箱中生活、釀蜜。如此多的蜜蜂在如此狹小的空間內(nèi)生活，卻能夠不感染任何病毒，秘密就在于蜂箱與外部相通的地方被一層蜂膠封住，而這層蜂膠具有超強(qiáng)的抗菌性。
吉列爾梅告訴記者，蜂膠從顏色看，綠色比棕色好，棕色比黑色好。雖然巴西全國各地都有可能出產(chǎn)蜂膠，但出產(chǎn)綠蜂膠的地區(qū)少之又少。這是因?yàn)榫G蜂膠必須到生長著具有超強(qiáng)抗氧化作用的迷迭香和酒神菊的地區(qū)采集，并且這一地區(qū)沒有污染。這就是為什么人們一定要到海拔700至1500米的深山中采集蜂膠的原因。
除了植被沒有被污染外，蜂種也非常重要。從事蜂膠生產(chǎn)25年的妮維雅強(qiáng)調(diào)，“非常重要的一點(diǎn)是巴西蜜蜂的品種”，它們是歐洲蜂和非洲殺人蜂的雜交后代。與體格較弱的歐洲蜂相比，雜交產(chǎn)物巴西殺人蜂不僅產(chǎn)膠多，而且體格壯，具有很強(qiáng)的免疫力，是世界上唯一不感染疾病的蜂種。因此蜂農(nóng)不需要給蜜蜂施用抗菌素來預(yù)防蜂疫。而且產(chǎn)膠的是工蜂，因此蜂膠里也沒有任何激素。
即使是產(chǎn)膠能力強(qiáng)的巴西殺人蜂，每個(gè)月一個(gè)2萬至3萬只蜜蜂的蜂箱出產(chǎn)蜂膠也僅一公斤左右。“蜜蜂家族”采集蜂膠的這個(gè)養(yǎng)蜂基地共有5000個(gè)蜂箱，年產(chǎn)約1.5噸蜂膠。整個(gè)米納斯吉拉斯州約有4萬個(gè)蜂箱。
氣候?qū)Ψ淠z的產(chǎn)量也有影響，如果連續(xù)下雨，蜂膠就會非常軟，無法收割。基地負(fù)責(zé)人馬特烏斯說，2016年有一個(gè)月連續(xù)下雨，造成產(chǎn)量大幅下降。
在養(yǎng)蜂基地，人們在上下蜂箱間設(shè)立間隙，誘使蜜蜂采集加工蜂膠，來封堵蜂箱間的縫隙。記者看到，有些蜂箱的縫隙已被蜂膠填滿。這時(shí)候，蜂農(nóng)可以用刀小心地將蜂膠割下來。大概一周時(shí)間，勤勞的小蜜蜂們再次將縫隙用蜂膠封起來。然后，蜂農(nóng)再割一次。當(dāng)然，這樣的重復(fù)操作最多只能持續(xù)3個(gè)多月。在一年中剩余的9個(gè)月中，這些蜜蜂的任務(wù)就是生產(chǎn)蜂蜜了。
妮維雅介紹，割下來的蜂膠會被送到工廠進(jìn)行分揀和清潔。人們剔除蜂膠在被采集過程中沾上的木屑，然后將之冷藏。在提純過程中，需要嚴(yán)格控制氧化時(shí)間，采用超臨界萃取工藝，使蜂膠中的有效成分最大限度析出，溶解液達(dá)到最大程度飽和。
拉亞集團(tuán)的蜂膠很多都出口到日本、韓國、馬來西亞等亞洲國家，近年來開始開拓歐洲和北美市場。
優(yōu)勢一、經(jīng)典配方:中科蜂膠養(yǎng)生寶是按照人體保健的需求針對當(dāng)代嚴(yán)重威脅人體健康的病痛,采用現(xiàn)代生物工程的離析組合技術(shù),在分子水平上對具有綜合調(diào)理作用的蜂膠和有延緩衰老效用的蜂王漿凍干粉以及被稱作營養(yǎng)寶庫的蜂花粉做了優(yōu)化提取和重新配伍而研制出來的新一代蜂膠制品――每100克中含總黃酮4300毫克,10-羥基-α-癸烯酸1100毫克,是蜂產(chǎn)品所有優(yōu)勢成分的完美結(jié)合,其比例增之一分嫌多,減之一分不及,是科學(xué)家專為中老年人開出的一劑健康處方,能充分激發(fā)各種蜂產(chǎn)品成分的潛在效用,起到立體式全方位的護(hù)衛(wèi)人體健康的作用。
優(yōu)勢二、效果卓著:中科蜂膠養(yǎng)生寶集蜂產(chǎn)品的優(yōu)勢成分于一身,濃縮了蜂產(chǎn)品的所有生物活性成分,使其作用更強(qiáng)、見效更快、效果更好。中科蜂膠養(yǎng)生寶的神奇效果引起了海內(nèi)外科學(xué)家的關(guān)注,許多專家還紛紛訂購進(jìn)行研究,希望能破解中科蜂膠養(yǎng)生寶的經(jīng)典配方。更有外國富商要重金購買這一經(jīng)典配方,都被婉言謝絕了,因?yàn)橹锌品淠z養(yǎng)生寶是極有價(jià)值的民族品牌。
優(yōu)勢三、科技結(jié)晶:中科蜂膠養(yǎng)生寶是國家九五重點(diǎn)科技攻關(guān)項(xiàng)目的科研成果,是中科院兩位院士、六位教授、三十九位高級工程師多年刻苦專研的結(jié)晶,是當(dāng)今最新科技的完美杰作。
優(yōu)勢四、原料純凈:中科蜂膠養(yǎng)生寶的膠原一直采用的是最優(yōu)質(zhì)的蜜蜂種群,其膠源位于高緯度無污染的黃山深山區(qū),這就從源頭上保證了中科蜂膠養(yǎng)生寶的原生態(tài)和優(yōu)質(zhì)性。
優(yōu)勢五、工藝超凡:中科蜂膠養(yǎng)生寶采用領(lǐng)先國際的脫鉛工藝,使其無雜質(zhì)殘留,食用起來更安全。
優(yōu)勢六、專利保護(hù):中科蜂膠養(yǎng)生寶其獨(dú)有的配方不僅通過國家衛(wèi)生部的認(rèn)證,而且獲得國家專利,受法律保護(hù)。
中科蜂膠養(yǎng)生寶上市11年來,以其獨(dú)有的六大優(yōu)勢和實(shí)實(shí)在在的效果得到了廣大消費(fèi)者的推崇和信賴,尤其是這十種人對它更是情有獨(dú)鐘:第一種心腦血管有問題的人:第二種血糖有問題的人:第三種免疫力低下的人;第三種長期胃腸不適的人;第四種有肝病的人;第五種有支氣管哮喘的人:第七種有更年期障礙的人:第八種自我保健意識強(qiáng)的人;第九種需要送禮的人;第十種追求實(shí)惠的人。
【摘要】 目的 觀察蜂膠總黃酮對D半乳糖誘導(dǎo)衰老模型小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響，并對其作用機(jī)制進(jìn)行了探討。方法 小鼠頸背部皮下注射D半乳糖42 d，制備衰老模型。通過小鼠學(xué)習(xí)記憶能力、腦組織中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSHPx)、丙二醛(MDA)、脂褐素(LF)水平的測定，評價(jià)蜂膠總黃酮的抗衰老作用。結(jié)果 與空白對照組相比，D半乳糖（150 g/kg，sc，42 d）使小鼠學(xué)習(xí)記憶能力降低，腦組織中SOD、GSHPx活性下降，MDA、LF含量增加，而蜂膠總黃酮30 mg/kg、60 mg/kg和90 mg/kg三個(gè)劑量組對上述病理變化具有不同程度改善作用。結(jié)論 蜂膠總黃酮能改善D半乳糖誘導(dǎo)衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶功能障礙，其機(jī)制可能是抗氧化調(diào)節(jié)自由基代謝。
【關(guān)鍵詞】 蜂膠；黃酮；學(xué)習(xí)記憶；脂褐素；衰老
蜂膠是蜜蜂從植物芽孢或樹干采集的蜂蜜，混入蜜蜂上頜腺分泌物和蜂蠟后加工制成的芳香味的膠狀固體物質(zhì)。蜂膠富含多種具有藥用價(jià)值的活性成分，其中主要是黃酮類化合物，研究發(fā)現(xiàn)蜂膠黃酮具有抗菌、抗病毒、抗炎癥、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、清除自由基等生物學(xué)活性〔1，2〕 。 而蜂膠黃酮對學(xué)習(xí)記憶的影響少見報(bào)道。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)蜂膠醇提物對各種學(xué)習(xí)記憶障礙模型小鼠具有明顯保護(hù)作用〔3〕 。本文在此基礎(chǔ)上，采用超聲法提取蜂膠總黃酮，觀察了其對D半乳糖誘導(dǎo)衰老模型小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響，并從抗氧化角度對其作用機(jī)制進(jìn)行了初步探討，以期為蜂膠的抗衰老作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 蜂膠原膠 由山東省實(shí)驗(yàn)種蜂廠提供。參照文獻(xiàn)〔4〕，超生法提取蜂膠總黃酮，臨用前0.15%吐溫80溶解，配成所需濃度備用。參照文獻(xiàn)〔5〕，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，用比色法測定總黃酮含量。
1.1.2 昆明種小鼠 體重18～22 g，由泰山醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號：魯動(dòng)質(zhì)字020103。
1.1.3 材料及儀器 D半乳糖，Amresco生產(chǎn)，上海貝基生物技術(shù)有限公司分裝，臨用前用生理鹽水配制合適濃度； 超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶（GSHPx）試劑盒、 丙二醛（MDA）試劑盒、脂褐素(LF)試劑盒、考馬斯亮藍(lán)測定試劑盒，購自南京建成生物工程研究所；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，購自中國藥品生物制品檢定所。KQ600DB型數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司生產(chǎn)；Y型迷宮刺激器，安徽省淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)；紫外分光光度計(jì)，上海棱光技術(shù)有限公司生產(chǎn)；RF5301PC熒光分光光度計(jì)，日本島津生產(chǎn)。
1.2 方法
1.2.1 動(dòng)物篩選、分組、給藥及模型的制備〔6〕
取2月齡昆明種小鼠放入Y型迷宮箱中適應(yīng)1～2 min，給予適當(dāng)電擊，至其對3臂均探索進(jìn)入為止，選擇活躍，對電擊反應(yīng)較敏感的小鼠，過于敏感和遲鈍小鼠被淘汰。篩選80只小鼠隨機(jī)分為5組，每組16只(雌雄各半)，對照組，D半乳糖衰老模型組，均灌胃等體積生理鹽水，蜂膠總黃酮低、中、高濃度組，分別以30、60、90 mg/kg 3個(gè)劑量進(jìn)行灌胃，給藥6 w。灌胃同時(shí)除生理鹽水對照組外，其余各組小鼠每只每日頸背部皮下注射D半乳糖150 mg/kg 1次，連續(xù)6 w，制備小鼠衰老模型。末次給藥后，進(jìn)行Y型迷宮試驗(yàn)。
1.2.2 Y型迷宮試驗(yàn)〔7〕
采用Y型迷宮法，迷宮共分為三個(gè)互通的臂。實(shí)驗(yàn)測試時(shí)，以A為起步區(qū)，B為安全區(qū)，C為危險(xiǎn)區(qū)。工作電壓20～30 V。小鼠在起步區(qū)受到電擊后，一次性跑入安全區(qū)為正確，否則為錯(cuò)誤，即為一次訓(xùn)練。下一次訓(xùn)練以B為起步區(qū)，C為安全區(qū)，A為危險(xiǎn)區(qū)，依次往復(fù)。共訓(xùn)練33次，其中前3次作為小鼠適應(yīng)環(huán)境不進(jìn)入統(tǒng)計(jì)，記錄后30次的錯(cuò)誤次數(shù)，為學(xué)習(xí)成績。24 h后，用同樣的方法測試，為記憶成績。
1.2.3 腦組織生化指標(biāo)的測定 測試后的小鼠快速斷頭處死，隨機(jī)每組選取8只，取其腦組織制成10%水相腦勻漿，測定脂褐素含量；另外8只取其腦組織用生理鹽水制成10%勻漿，3 000 r/min低溫離心10 min，取上清液測定SOD、GSHPx活性及MDA含量。考馬斯亮藍(lán)作蛋白定量。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)用x±s表示，使用SPSS14.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間顯著性檢驗(yàn)采用單因素方差分析。
2 結(jié)果
2.1 蜂膠總黃酮對衰老模型小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響 與對照組相比，模型組小鼠學(xué)習(xí)記憶功能明顯衰退，表現(xiàn)為學(xué)習(xí)實(shí)驗(yàn)和記憶實(shí)驗(yàn)的錯(cuò)誤次數(shù)均明顯增多（P＜0.01），說明建模成功。與衰老模型組相比，蜂膠總黃酮三個(gè)劑量組能明顯降低小鼠的錯(cuò)誤次數(shù)（P＜0.01，P＜0.05），說明蜂膠總黃酮能改善衰老小鼠的學(xué)習(xí)記憶。見表1。
2.2 蜂膠總黃酮對衰老模型小鼠腦組織SOD、GSHPx活性及MDA、LF含量的影響 與對照組相比，模型組SOD、GSHPx活性明顯降低，MDA、LF含量明顯升高（P＜0.01或P＜0.05），符合小鼠衰老規(guī)律。與衰老模型組相比，蜂膠總黃酮中、高劑量組SOD、GSHPx活性顯著提高（P＜0.01或P＜0.05），而MDA、LF含量蜂膠總黃酮三個(gè)劑量組都明顯下降（P＜0.01）。說明蜂膠總黃酮能提高衰老小鼠腦組織中SOD、GSHPx活性，降低MDA、LF含量，減輕模型鼠的過氧化損傷。見表2。
表1 蜂膠總黃酮對衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響（略）
與模型組比較：1)P＜0.01，2)P＜0.05
表2 蜂膠黃總酮對衰老小鼠腦組織SOD、GSHPx、 MDA、LF水平的影響 （略）
與模型組比較：1)P＜0.01，2)P＜0.05
3 討論
D半乳糖致衰老模型是基于衰老的代謝學(xué)說而復(fù)制的一種衰老模型，其衰老反應(yīng)接近或相當(dāng)于自然衰老。研究表明〔8〕D半乳糖造成的衰老模型可使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶能力明顯下降，本研究結(jié)果也發(fā)現(xiàn)，皮下注射D半乳糖6 w后，小鼠學(xué)習(xí)實(shí)驗(yàn)與記憶實(shí)驗(yàn)錯(cuò)誤次數(shù)明顯增多，學(xué)習(xí)記憶能力下降。而在D半乳糖造模的同時(shí)給以蜂膠總黃酮，可明顯改善小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。提示蜂膠總黃酮具有益智的功效，這與先前的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致〔3〕 。
D半乳糖致衰老模型具有與自然衰老相似的自由基代謝紊亂特征〔9〕 。隨年齡增長，機(jī)體抗氧化系統(tǒng)物質(zhì)合成、活性均下降，清除氧自由基的能力下降，導(dǎo)致自由基堆積，產(chǎn)生大量代謝產(chǎn)物MDA，對機(jī)體產(chǎn)生損害，加速衰老。機(jī)體內(nèi)存在的清除自由基防御系統(tǒng)包括SOD、GSHPX、過氧化氫酶(CAT)等抗氧化酶，及維生素A、維生素C 和維生素E 等抗氧化物質(zhì)〔10〕 。SOD能促使超氧化物陰離子自由基變?yōu)檫^氧化氫和氧離子，防止氧自由基破壞組織和細(xì)胞；GSH能特異性催化谷胱甘肽對過氧化氫的還原反應(yīng)，起到保護(hù)細(xì)胞膜的作用；MDA是衡量機(jī)體內(nèi)自由基代謝的敏感指標(biāo)，客觀反映體內(nèi)自由基的水平；自由基作用于多不飽和脂肪酸產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化物，后者產(chǎn)生醛基和羰基，導(dǎo)致大分子交聯(lián)，最終形成LF，隨年齡的增長，LF越積越多，因此機(jī)體LF的含量可以反映衰老〔11～13〕 。本研究發(fā)現(xiàn)，給予D半乳糖后，小鼠腦組織SOD、GSH活性下降，而過氧化產(chǎn)物MDA、LF含量明顯增高，這與文獻(xiàn)報(bào)道一致〔14〕，說明造模成功。而給予D半乳糖同時(shí)給以蜂膠總黃酮可使SOD、GSH活性顯著提高，MDA、LF的含量明顯下降，這提示，蜂膠總黃酮對抗D半乳糖誘導(dǎo)衰老的作用機(jī)制是通過阻斷自由基鏈反應(yīng)的各個(gè)環(huán)節(jié)，從而對抗自由基對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷，有效改善D半乳糖誘導(dǎo)的學(xué)習(xí)記憶障礙。
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我今年82歲，已進(jìn)入耄耋之年，經(jīng)過20多年的養(yǎng)生保健，長期“陪伴”我的慢性支氣管炎、慢性結(jié)腸炎、慢性膽囊炎都已先后痊愈，近幾年痔瘡也未復(fù)發(fā)過，20多年來未因重病住院，生活完全自理。我現(xiàn)在精力充沛，耳聰目明，思維清晰，仍能筆耕撰稿。除保持樂觀的心態(tài)和遠(yuǎn)離不良嗜好外，主要采取以下方法：
一、素食為主 平衡膳食
我過去患有慢性結(jié)腸炎，如吃瘦肉較多便會誘發(fā)，更不宜吃油膩食物。1995年我在體檢時(shí)發(fā)現(xiàn)血脂超標(biāo)，這是心血管疾病的前兆，絕不可掉以輕心，而平衡膳食是配合治療高血脂的重要環(huán)節(jié)。于是，我每天定量食蔬菜400～500克，葷食是豬瘦肉、有鱗魚等120～150克，植物油約20克，食鹽適量。長期的清淡飲食，使我保持了旺盛的食欲。而米面等主食控制在350～400克，食勿過量，每頓八成飽，尤其是晚餐要少吃。經(jīng)常吃豆制品、豆類菜、瓜類、葉菜類、洋蔥、胡蘿卜、蘑菇、西紅柿和紫菜等。盡量不吃那些高膽固醇、高脂肪的食品，如動(dòng)物內(nèi)臟、魚子、皮蛋等。每天吃些水果，適當(dāng)多飲茶水，保持腸道通暢。
二、常食佳品――黑木耳
經(jīng)常吃黑木耳會稀釋血液，不易患腦血栓、冠心病等。我于2003年起長期堅(jiān)持食用黑木耳，受益不小。黑木耳以春季的為最好，膨脹率大，朵朵肥厚，雜質(zhì)少。食法很簡單，先加冷水將其發(fā)開，棄雜洗凈，然后棄水用火蒸熟，冷后放入冰箱冷藏，每天就餐前在菜里或面食中加入一些。日需干黑木耳5～8克。
三、又服珍品――蜂膠
我長期從事養(yǎng)蜂工作，對蜂產(chǎn)品的醫(yī)療保健作用有所了解，因而聯(lián)想到被專家譽(yù)為“紫色黃金”和“血管清道夫”的蜂膠。蜂膠的主要成分為黃酮類化合物，有凈化血液、軟化血管的作用，能降低血脂、血壓、血糖和血黏度，是抗癌的重要輔助品，也是天然的抗氧化劑。于是我著手用蜂膠末、食用酒精(比例為1:4，經(jīng)常搖動(dòng)促其溶解)自制蜂膠酊。每晚臨睡前用注射器計(jì)量，加溫開水稀釋后口服，每天服純蜂膠約1克。美中不足的是味道不好，口服有些難度，再加上自制蜂膠酊經(jīng)多次提取上層酊汁后，很難計(jì)算含蜂膠的量。2006年起我改服蜂膠片，每天清晨和晚上睡前空腹共服8片，比自制蜂膠酊要好。
四、有氧運(yùn)動(dòng) 適度鍛煉
生命在于運(yùn)動(dòng)。對老年人來說，生命在于適當(dāng)運(yùn)動(dòng)，做到動(dòng)靜結(jié)合，勞逸結(jié)合。適度鍛煉，可以改善老年人的生活質(zhì)量和自理能力。因此，我每天一般在傍晚散步40分鐘以上。在散步同時(shí)做深呼吸運(yùn)動(dòng)，不斷吐故納新。這種有氧運(yùn)動(dòng)對身體十分有利。平時(shí)生活環(huán)境也注意空氣流通，這樣可以增加血液中的氧氣，清醒頭腦，煥發(fā)精神。另外，我還飼養(yǎng)了少量蜜蜂，借以陶冶情操，勞動(dòng)身心，增加戶外運(yùn)動(dòng)量，使精神有所寄托。此外，還做些力所能及的家務(wù)勞動(dòng)。現(xiàn)在對我來說，健康長壽已經(jīng)初步獲得成效。今后要不斷堅(jiān)持，相信暮年晚景將會更加幸福美滿。
